Introduction
En los últimos años la tecnología de la columna de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) ha avanzado mucho; capacidades de pico han aumentado considerablemente en gran parte gracias a la utilización de tamaños de partículas más pequeñas y las partículas de núcleo y corteza más eficientes. Desde separaciones son en general más eficientes, un flujo en efecto ha sido un aumento en la sensibilidad desde picos son ahora más nítida y por lo tanto más alto 1-8.
Sin embargo, la heterogeneidad radial cama sigue siendo un factor limitante en el desempeño de todas las columnas, pero esto no es una nueva historia desde cromatógrafos lo saben desde hace muchos años. Camas de columna son heterogéneos tanto en la dirección radial 9-12, y a lo largo de la columna eje 10,12-15. La pared de efecto especial es un importante contribuyente a la pérdida de 7,16-18 rendimiento de separación. Shalliker y Ritchie 7 recientemente revisado los aspectos de la heterogeneidad lecho de la columna y por lo tanto no es preciso referirnosd aquí aún más. Aunque basta con decir, que la variación en la columna de densidad de empaquetamiento de cama y los efectos de pared conducen a una deformación del enchufe soluto, de tal manera que las bandas eluyen a través de la columna en tapones que se asemejan parcialmente lleno de sopa cuencos en lugar de discos sólidos finos planos 7 que están representada generalmente en los textos básicos de enseñanza. Cuando los experimentos se llevaron a cabo de tal manera que la migración de soluto a través de la cama podría ser visualizado los perfiles de enchufe dentro de la columna fueron parcialmente hueco y la sección del tizón de la banda es en gran medida el componente de la pared del tapón de muestra. El resultado final es que se necesitan muchos más placas para separar estos tapones '' parcialmente hueco del que sería necesario si los discos eran sólida y plana 12,14,17. Para superar la banda ampliando problemas asociados a los efectos de la pared y la variación en la densidad de empaquetamiento radial, una nueva forma de tecnología de la columna conocida como tecnología activa de flujo (AFT) fue diseñado 7,19. El propósito de este diseño erapara eliminar los efectos de la pared a través de la separación física de disolvente de elución a lo largo de la zona de la pared, de la de la fase móvil de elución en la región central radial de la columna 19. Hay dos tipos principales de columnas AFT; Segmentado Flow (PSF) y columnas paralelas cortina de flujo (CF) 7 columnas. Dado que este protocolo está dirigido a la utilización y la optimización de las columnas de CF, no se discutirán más columnas de PSF.
Cortina de flujo (CF)
formatos de columna cortina de flujo (CF) utilizan finales accesorios de AFT, tanto a la entrada y la salida de la columna. AFT finales accesorios consisten en una frita de anular situada dentro de un adaptador de múltiples orificios. La frita se compone de tres partes: una parte central radial porosa que está alineado con el puerto central del final apropiado, una parte exterior porosa que está alineado con el puerto de periféricos (s) del accesorio en el extremo, y un anillo impermeable que separa las dos partes porosas que impiden cualquier cruz-flow entre las regiones central y exteriores radiales de la frita 19. La figura 1 ilustra el diseño de la frita de AFT y la Figura 2 ilustra el formato de columna CF. En este modo de operación (CF) de la muestra se inyecta en el puerto central radial de la conexión de entrada, mientras que la fase móvil adicional se introduce a través del puerto de periféricos de la entrada de "cortina" la migración de los solutos a través de la región central radial de la columna. Por lo tanto la muestra entra en el lecho en la región central radial de la columna con la región exterior de la columna que tiene fase móvil sólo pasa a través de ella. Los estudios han demostrado que una relación volumétrica velocidad de flujo de alrededor de 40:60 (central: puerto de periféricos) para la entrada de herraje final de una columna de 4,6 mm de diámetro interno (ID) es 6,7,16 óptima. La salida AFT de la columna de CF permite el ajuste del flujo central y periférico para su porción relativa y se puede variar para casi cualquier rati deseadoo mediante la gestión de presión. La optimización de una columna de CF puede mejorar significativamente diferentes aspectos funcionales de la tecnología de la columna, como la eficiencia de separación o sensibilidad de detección. De esta manera se establece un "muro-less ',' infinito de diámetro" o la columna "virtual" 6,10,18,20. El propósito de columnas CF es gestionar activamente la migración de la muestra a través de la columna para evitar que la muestra llegue a la zona de la pared. Por lo tanto, la concentración de soluto a la salida al detector se maximiza, el aumento de sensibilidad de alrededor de 2,5 veces mayor que el formato de columna convencional cuando se utiliza radiación ultravioleta (UV) de detección 16, y aún mayor cuando se utiliza la detección de espectro de masas 6.
columnas CF son idealmente adecuados para muestras de baja concentración, ya que se aumenta la sensibilidad de detección. Además, son ideales cuando se acopla a fluir detectores limitadas de tasa, como el espectrómetro de masas (MS) 6. Un Acolumna de FT en un formato de ID 4,6 mm, por ejemplo se puede ajustar para entregar el mismo volumen de disolvente a un detector como una columna estándar de 2,1 mm formato ID cuando funcionan a las mismas velocidades lineales, mediante el ajuste de la salida de flujo central a 21%. Asimismo, la columna AFT también podría ser sintonizado para ofrecer la misma carga de volumen a un detector como una columna de ID 3,0 mm, mediante el ajuste de la salida de flujo central a 43%. De hecho, cualquier formato de columna "virtual" podría ser producido para adaptarse al requisito de análisis 6,18,22. El uso de estos finales accesorios diseñados especialmente en la entrada y la salida se asegura de que se establece una columna verdadera pared menos.
Hay dos maneras de configurar el sistema de suministro de disolvente a los puertos centrales y periféricas de la entrada:. Sistema de flujo dividido 6 y dos 6,7 sistema de bombeo La figura 3 ilustra cada uno de estos sistemas CF montajes.
Sistema de flujo dividido
yona sistema de flujo dividido (Figura 3A) el caudal de la bomba que conduce al inyector es pre-inyector de división utilizando un muerto cero volumen pieza en T, donde una corriente de flujo de la fase móvil está conectado al inyector, que está conectado a continuación, a la puerto central de la entrada de herraje final de la columna. La segunda corriente de flujo de la fase móvil por-pasa el inyector y está conectada al puerto de periféricos en la entrada de la columna. Durante la división del flujo, el porcentaje corriente de flujo se ajusta a 40:60 (centro: periférica) antes de que las líneas están conectadas a la columna, es decir, desde el inyector hasta el centro y la bomba para periférica.
Sistema de dos bombas
La columna CF requiere dos corrientes de flujo en la entrada de herraje final de la columna. Dependiendo del tipo de inyector automático / inyector del instrumento de HPLC, una fracción de flujo establecido puede no ser posible, y así CF puede ser logrado a través de 2 bombas (Figura 3B 21). Cada bomba se asigna y se conecta a ya sea el puerto central o periférico y el caudal se ajusta para representar 40% del flujo para el puerto central y 60% para el puerto periférico. Por ejemplo, si la velocidad de flujo total es de 1,0 ml min -1, la tasa de flujo de la bomba central se establece en 0,4 ml min -1 y la bomba periférica se establece en 0,6 ml min -1.
La elección de qué modo de funcionamiento depende en gran medida de la instrumentación de HPLC y el modo cromatográfico de operación. Por ejemplo, en algunos inyectores automáticos un cambio de presión entre la posición de carga de muestra y la muestra se inyecta posición se puede producir la interrupción de la relación de flujo dividido y por lo tanto en este caso una bomba dual establecido sería recomendable para un rendimiento óptimo CF. Independientemente del sistema de suministro de disolvente configurar elegido para la entrada de la columna de la CF, la optimización de salida CF sigue siendo el mismo. El puerto central de salida de la columna de la CF está unido al detector ultravioleta-visible (UV-Vis) con el smalno sea posible el volumen de la tubería para minimizar los efectos de post-columna volumen muerto. Dado que, columnas CF emulan columnas de pequeño diámetro, volumen muerto entre la salida de la columna y el detector es perjudicial para el rendimiento de separación de la columna de la FQ. Es crítico para asegurar la cantidad más pequeña de volumen de tubo entre el puerto central y el detector de UV-Vis a minimizar los efectos de volumen muerto tales como ensanchamiento de las bandas, la pérdida en la eficiencia y sensibilidad. Por lo tanto, se recomienda el uso de tubos de diámetro estrecho (0,1 mm de diámetro) para permitir fácilmente los ajustes de presión sin añadir volumen muerto apropiado. Tubing también está unido al puerto de periféricos y dirigido a los residuos. A la salida de la columna de la CF, la relación de segmentación se puede ajustar a cualquier relación que se adapte a la finalidad de la analista. Cuando se utiliza un 4,6 mm ID CF, por ejemplo, a menudo es conveniente para ajustar la relación, ya sea como 43:57 o 21:79 (en el centro: periférica) para emular una columna id 'virtual' 3,0 mm o una columna ID 2,1 mm,respetuosamente. De esta forma el rendimiento de la separación es fácilmente banco marcados. La relación de segmentación se mide pesando la cantidad de caudal de salida del detector que está conectado al puerto central y flujo que sale del puerto de periféricos durante un período de tiempo. El flujo a través de cada puerto porcentaje se puede determinar entonces y las relaciones se puede ajustar mediante la alteración de la longitud del tubo conectado o el uso de tubos que tiene un diámetro interno diferente (id).
Este protocolo de vídeo se describen los procedimientos de operación y optimización de una columna de cromatografía CF para un rendimiento mejorado.
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Protocol
Precaución: Por favor, consulte las hojas de datos de seguridad del material (MSDS) para todos los materiales y reactivos antes de su uso (es decir, Pedidos de metanol). Asegurar el uso de todas las prácticas apropiadas de seguridad al manipular disolventes y cromatografía líquida de eluyente alta resolución (HPLC). Asegurar el uso apropiado de los controles de ingeniería de HPLC, balanza analítica y un detector de instrumentación, y asegurar el uso de equipo de protección personal (gafas de seguridad, guantes, bata de laboratorio, pantalones largos y zapatos cerrados).
Nota: Este protocolo contiene instrucciones sobre cómo utilizar una columna CF en un sistema de HPLC acoplado con un detector UV-Vis. El protocolo ha sido escrito asumiendo que el lector tenga conocimientos básicos y experiencia en cromatografía.
1. Configuración del Instrumento HPLC
Nota: En esta sección se puede modificar para adaptarse a las necesidades de los analistas, es decir, la elección de disolventes, detector de longitud de onda y el caudal queson apropiadas para la muestra de interés.
- Preparar el instrumento de HPLC con agua ultrapura 100% (por ejemplo, agua Milli-Q) para la línea A y metanol al 100% para la línea B como la fase móvil y purgar las bombas según el requisito del fabricante.
- Ajuste el detector de UV-Vis a 254 nm.
- Elija un modo de división de flujo pre-inyección de puesta a punto, o una de doble flujo de la bomba puesta a punto. Para el modo de flujo dividido continúe en el paso 2, para el modo de doble bomba continúe con el paso 3.
2. Configuración del sistema Split-flujo
- Desconecte la línea de bomba de la válvula del inyector del muestreador automático.
- Coloque una pieza en T a la línea de la bomba.
- Coloque una pieza de 15 cm de tubo de Identificación de 0,13 mm a cada puerto de la pieza en T.
- Conecte un tubo a partir de la pieza en T al inyector de la válvula de muestreador automático.
- Poner la bomba en 1,0 ml min-1.
- Antes de conectar las líneas de bomba a la entrada de la columna de la CF, ajustar la relación de segmentación del flujo de 40%: 6 0% (línea central: línea periférica) de la siguiente manera en el paso 2.7.
- Ajuste de la relación de entrada CF en el sistema de flujo dividido
- Medir la masa de los dos recipientes de recogida vacíos usando una balanza analítica y la etiqueta de un recipiente de recogida central y otro periférico (una para la línea del muestreador automático para centrar el puerto y otro para la línea de la pieza en T al puerto de periféricos) .
- Para 1,0 min, recoger la fase móvil que sale de la línea que viene del inyector (en el punto que se conectará a la columna) en el recipiente de recogida, cuya masa se midió en 2.7.1.
- Volver a pesar el recipiente de recogida en la escala de análisis y determinar la masa de la fase móvil recogido.
- Repetir los pasos 2.7.2 a 2.7.3 para el eluyente que sale de la línea de la pieza en T que ha de ser conectado al puerto periférico.
- Determinar el porcentaje de flujo (ml min -1) de cada línea de flujo de acuerdo con las siguientes ecuaciones:
1 "src =" / files / ftp_upload / 53471 / 53471eq1.jpg "/> - Ajustar la relación de flujo al 40%: 60% (± 2%) (línea de inyector de puerto central: línea de pieza en T de puerto de periféricos). Si la línea desde el inyector al porcentaje de flujo de puerto central está por encima de 40%, aumentar la caída de presión por la disminución del diámetro interno de la tubería, o el aumento de su longitud. Si la línea de inyector al porcentaje de flujo de puerto central está por debajo de 40%, aumentar el diámetro interno de la tubería o disminuir la longitud del tubo.
- Una vez que las relaciones de flujo están sintonizados gire el caudal de la bomba fuera.
- Conecte la línea desde el inyector al puerto central de la entrada de la columna y la línea de la pieza en T al puerto de periféricos de la entrada de la columna.
- La rampa lentamente la velocidad de flujo de 1,0 ml min-1 a 100% la línea B.
- Equilibrar la columna (4,6 mm DI x 100 mm de longitud) al permitir100% de metanol (línea B) de la fase móvil fluya por la columna a 1,0 ml min-1 durante 10 min. Esta vez se escala de acuerdo a las dimensiones de otras columnas, el usuario puede emplear.
- Para la puesta a punto de la salida CF vaya al paso 4. 'Ajuste de flujo de salida CF'.
3. Configuración del sistema de dos bombas
- Conectar la bomba del sistema HPLC para el inyector y luego conectar la línea desde el inyector al puerto de entrada central de la columna.
- Conectar la bomba adicional directamente al puerto de periféricos de entrada de la columna. Tenga en cuenta que esta segunda bomba-inyector pasa.
- Rampa la velocidad de flujo de la bomba del sistema conectado al puerto central en 0,4 ml min -1 (representante del 40% de la velocidad de flujo total de 1,0 ml min -1) a 100% de metanol (línea B).
- Al mismo tiempo que la Etapa 3.3, rampa la velocidad de flujo de la bomba periférica a 0,6 ml min -1 (representante del 60% de la velocidad de flujo total de1,0 ml min-1) a 100% de metanol (línea B).
- Equilibrar la columna (4,6 mm DI x longitud 100 mm), permitiendo% metanol 100 (línea B) de la fase móvil a fluir a través de la columna a 1,0 ml min-1 durante 10 min. Esta vez se escala de acuerdo a las dimensiones de otras columnas, el usuario puede emplear.
- Para la puesta a punto de la salida CF vaya al paso 4. 'Ajuste de flujo de salida CF'.
4. Ajuste de CF flujo de salida
- Conectar el puerto de salida central para el detector de UV-Vis utilizando una pieza 15 cm de tubo de Identificación del 0,13 mm.
- Conectar una pieza 15 cm de tubo de Identificación del 0,13 mm al orificio de salida periférica de la columna de la CF.
- Se pesa la masa de dos recipientes de recogida vacíos en la balanza analítica y etiquetar un recipiente central y otro periférico.
- Durante 1,0 min, recoger la fase móvil que sale del detector (flujo central) UV-Vis en la etiqueta recipiente de recogida central, cuya masa se midió en 4,2.
- Volver a pesar el recipiente de recolección que contiene el eluyente recogido en la escala de análisis y determinar la masa de fase móvil recogido.
- Repetir los pasos 4.4 a 4.5 para el eluyente que sale de la línea desde el puerto de salida periférica.
- Determinar el porcentaje de flujo de cada línea de flujo de acuerdo con las siguientes ecuaciones:
- Ajustar la relación de flujo a 21%: 79% (± 2%) (flujo de salida central de UV-Vis: flujo de salida periférica de la línea). Si el porcentaje de flujo central de la UV-Vis está por encima de 21%, aumentar la caída de presión al disminuir el diámetro interno de la tubería unida a la salida del detector de UV-Vis, o el aumento de su longitud. Si el porcentaje de flujo central de la UV-Vis está por debajo de 21%, aumentar el diámetro interno del tubo conectado a la salida del detector de UV-Vis, o disminuir la longitud del tubo. Cada vez que la longitud del tubo ha sido cambiado, repeticiónpasos 04.03 a 04.07.
Nota: La columna CF en el modo de Identificación "virtual" de 2,1 mm está listo para su análisis.
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Representative Results
AFT columnas fueron desarrolladas utilizando un diseño especializado frita (Figura 1) en la columna multipuerto finales accesorios para superar la cama heterogeneidad columna y mejorar el rendimiento de separación. Un estudio entre laboratorios en el rendimiento de separación de columnas de cromatografía CF (Figura 2) se llevó a cabo con un sistema de doble bomba de configurar (Figura 3B) como se describe en la sección 3 de este protocolo 23. Una mezcla de tres prueba de componentes se analizó bajo a través de un ID de "virtual" 2,1 mm, donde 21% del flujo de salida central de la columna de CF fue dirigida al detector. La separación de una mezcla de prueba de tres componentes ilustra el rendimiento mejorado en términos de eficiencia y sensibilidad, de una columna de CF en relación con columnas estándar. La mezcla de ensayo contenía tres componentes fenetol, butilbenceno y pentilbenceno y se analizó en 4.6 y 2.1 mm id columnas convencionales y un 4,6 la columna Identificación del CF mm con una relación de segmentación de 22:78 (centro: periférica) para emular un ID de 2,1 mm (Figura 4). eficiencia de separación se evaluó en términos de recuento en placa (N), y la sensibilidad. El uso de la columna de CF para el análisis mostró un límite inferior de detección (Figura 5) y un aumento en la sensibilidad (Figuras 4 y 6) en comparación con los análisis de columna convencional. Se encontró también que, independientemente del laboratorio o el tipo de sistema de HPLC que se emplea, el resultado rendimiento de separación para la columna de CF era relativamente la misma, todo lo cual resulta en el rendimiento de separación mejorada cuando se emplea CF columnas de cromatografía 23.
Figura 1. Ilustración de la columna de diseño frita de ajuste de fin de Active tecnología de flujo. OAD / 53471 / 53471fig1large.jpg "target =" _ blank "> Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2. columna AFT -. Formato de columna CF Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3. Conjunto de flujo de entrada de la columna CF en la configuración del sistema (A) de flujo dividido y (B) la configuración del sistema 2 de la bomba. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Figura 4. Una separación típica de la mezcla de ensayo de tres componentes obtenido utilizando el sistema de Ultimate 3000. (A) la columna ID 4,6 mm convencional, (b) la columna ID convencional 2,1 mm, columna (c) flujo de cortina que opera con una segmentación de salida 22% proporción. Los solutos: (i) fenetol, (ii) butilbenceno y (iii) pentilbenceno. Esta cifra se ha extraído de 23. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 5. Perfiles de elución de la banda butilbenceno en el límite de detección en (a) la columna convencional, y (b) el flujo de cortina de la columna del sistema:. Shimadzu a 2,0 ml / min, 5 de inyección de l, detección a 254 nm. Esta cifra se ha extraído de
Figura 6. Comparación de los perfiles de elución de butilbenceno obtenidos en el sistema de Ultimate 3000. (A) la columna ID de 4,6 mm convencional, (b) la columna ID de 2,1 mm convencional, (c) la columna de flujo de cortina con una segmentación de salida 22% proporción. Esta cifra se ha extraído de 23. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Discussion
Este estudio incluyó el análisis entre laboratorios de columnas de cromatografía CF para probar el funcionamiento analítico en términos de eficiencia y sensibilidad. La columna CF se creó con un sistema de bombeo de doble tal como se describe en la sección "3. sistema de bomba dual establecido 'para lograr una relación de flujo de 40:60 (centro: periférica) en la entrada de la columna de la FQ. El 40:60 (centro: periférica) relación de flujo se consigue mediante el ajuste del caudal de cada bomba para el valor que representa 40% y el 60% de la velocidad de flujo total, respectivamente. La salida de la columna CF estaba sintonizada en una columna de "virtual" con un id de 2,1 mm siguiendo el procedimiento descrito en la sección "4. Sintonización de flujo de salida CF '. Una mezcla muestra que contiene fenetol, butilbenceno y pentilbenceno fue utilizado como un estándar de prueba para una comparación de rendimiento de separación entre una columna de 4,6 mm de diámetro interno CF (22:78) y columnas ID convencionales 4.6 y 2.1 mm. Figura 4 es una superposición de la chromatograpseparación de HIC de la mezcla de ensayo a cabo utilizando cada una de las tres columnas. La principal diferencia observada en esta figura es el aumento significativo en la respuesta de la señal para la separación obtenida usando la columna de la CF. La respuesta de la señal para los 4,6 y 2,1 mm id columnas convencionales fueron casi idénticos como se esperaba ya que las condiciones cromatográficas fueron escalados para que coincida con la superficie de la sección transversal de las columnas.
Linealidad y los límites de detección también se evaluaron entre los modos convencionales de funcionamiento, donde se preparó una serie de normas y analizado en repeticiones en diferentes sistemas de HPLC con diferentes tasas de flujo y CF. Independientemente de qué sistema de HPLC se utilizó y a qué velocidad de flujo de los resultados de análisis fue esencialmente el mismo, donde la respuesta de la señal de CF fue siempre significativamente mayor que las otras columnas convencionales. ganancias de respuesta de la señal eran típicamente entre 1,7 y 2,8 veces mayor que las columnas convencionales. Un 5 vecesSe observó - (RSD%, es decir, en relación desviación estándar) de altura de pico para la serie estándar más bajo para el modo de CF de operación en 22% en comparación con la columna ID de 2,1 mm convencional mejora en la precisión de las mediciones. CF mejora la precisión de las mediciones de pico debido al incremento en la sensibilidad que se obtiene por CF. Cuanto mayor es la respuesta de la señal más bajo es el valor de RSD. Por lo tanto, como consecuencia de la precisión de pico respuesta mejorada de la señal también se mejora, también la eficiencia es mayor, por lo que las bandas de cola y por lo tanto menos pico integración es más precisa. Los límites de la detención y cuantificación utilizando columnas CF con una relación de segmentación de salida de 22:78 (centro: periférica). También se mejoraron hasta 2,3 veces más que la columna ID de 2,1 mm convencional 23 de la figura 5 ilustra el límite cerca de respuesta de detección de butilbenceno pico en las condiciones CF y condiciones convencionales.
Un aspecto importante a la comparisón entre CF y columnas convencionales que no es evidente en la Figura 4 es la reducción en el volumen de pico para los analitos en las muestras en condiciones de FQ. La Figura 4 presenta los picos con respecto al tiempo, sin embargo, ya en el modo de CF sólo una parte de la flujo total está siendo utilizado, la anchura del pico cual se puede modificar con respecto al volumen. Figura 6 compara el perfil de elución butilbenceno con respecto al volumen máximo para CF (22:78) emulando un 2,1 mm de diámetro interno "virtual", una columna de Identificación convencional de 4,6 mm y un 2,1 mm de diámetro convencional el volumen pico entre el CF y las columnas mm convencionales 2.1 era casi idéntica, sin embargo, el volumen máximo de la columna de 4,6 mm la convencional era aproximadamente 5 veces más grande que tanto convencionales 2,1 mm y CF (22:78) . Es importante destacar que la reducción del volumen pico en el modo de CF no resultó en una reducción de la respuesta de la señal, sino más bien un aumento de casi 3 veces más que la de las columnas convencionales regardless de diámetro interno 23. A pesar de una reducción del volumen máximo puede no ser importante para la detección UV-Vis, lo mismo no puede decirse de los procesos de detección que son dependientes o caudal limitado, por ejemplo, espectrómetro de masas o un detector de dispersión de luz evaporativo.
La desventaja al modo de CF de la operación como la de columnas convencionales de ánima más estrecha es su susceptibilidad a los efectos de post-columna de volumen muerto, que pueden deteriorar significativamente el rendimiento de separación haciendo que ensanchamiento de las bandas y la decadencia en la intensidad de la señal. Sin embargo, el volumen muerto en la entrada es menos importante. Por lo tanto, el debido cuidado para el tubo post-columna es necesaria para el funcionamiento óptimo de separación CF. cromatografía CF es un nuevo tipo de tecnología de columna que tiene un gran potencial en aplicaciones futuras. Por ejemplo, la inyección de una muestra de baja concentración en el centro de la columna de la CF, es "cortina" por la pared (periférica) concent fase móvilla calificación de la muestra dentro del centro de la columna de la CF, y maximizando así la respuesta de la señal. A la salida sólo el flujo central que contiene la muestra "concentrado" se toma para el detector, proporcionando un aumento de la sensibilidad, ideal para el análisis a alta velocidad utilizando altas velocidades de flujo en los detectores de flujo limitados tales como MS 6.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| HPLC instrument | |||
| Additional Pump | Required if 2 pump CF system set up is to be used. | ||
| Curtain Flow HPLC column | Thermo Fisher Scientific | Not Defined | Soon to be commercialized |
| Methanol | Any brand | HPLC Grade | |
| PEEK tubing | Any brand | Various lengths and i.d. | |
| PEEK tube cutter | Any brand | ||
| Analytical Scale Balance | Any brand | ||
| Stop watch | Any brand | ||
| Eluent collection vessels | Any brand | 1-2 ml sample vials can be used as eluent collection vessels | |
| T-piece | Any brand |
References
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