协议星形胶质细胞的三维共聚焦形态分析
Summary
Astrocytes in the CNS change their functional and structural properties in response to harmful stimuli. This report presents a protocol for assessment of three-dimensional astrocyte morphology in diseased conditions or after therapeutic interventions.
Abstract
如神经胶质细胞在大脑中，星形胶质细胞在中枢神经系统中多样化的功能角色。中的有害刺激的存在下，星形细胞修改他们的功能和结构性质，一个称为反应性星形胶质细胞增生的条件。这里，一个协议的星形胶质细胞的形态性质的评估呈现。这个协议包括12个不同参数，即表面积和所覆盖的星形胶质细胞（星形胶质细胞境）的组织，在整个星形胶质细胞，包括分支，细胞体，和细胞核，体积定量分支以及总长度和数量，强度用于星形胶质细胞的检测抗体的荧光免疫反应性，和星形胶质细胞密度（个/ 1000微米2）。为了这个目的所创建的三维（3D）的共焦显微镜图像和3D图像分析软件如Volocity 6.3用于测量。大鼠脑组织暴露于淀粉样蛋白1-40 </子>（Aβ1-40）具有或不具有治疗性干预是用于呈现方法。该协议也可以被用于其它细胞在体内或体外条件的三维形态测定分析。
Introduction
在健康的中枢神经系统（CNS），星形胶质细胞发挥 血流量，能量代谢，突触功能和可塑性，和细胞外离子的调节中起重要作用的神经递质和动态平衡1-3。此外，星形胶质细胞，以不同的有害刺激和异常时，例如通过反应性星形胶质细胞增生其特点是肥大，增殖和星形胶质细胞4,5-功能重塑外伤，感染，局部缺血或神经变性响应。
反应性星形胶质可以设计在组织中的炎症反应和修复过程，因此，可能会影响治疗性干预的临床结果。因此，星形细胞已经在过去几十年，作为治疗性干预的各种影响CNS疾病的潜在目标接收到的关注神经学家。
星形胶质细胞通常有一个星状的形状，以及-Defined分支中传遍了SOMA 6。在大脑中的疾病状况，星形分支成为旋绕和显示肿胀的端部7中，例如在淀粉样蛋白β（Aβ）的存在。
本文介绍了协议分析由共聚焦显微镜获得的星形胶质细胞的三维图像。测量了每个星形细胞十二个不同的量化参数：所述表面区域和星形胶质细胞的领土（覆盖有星形细胞的组织），整个细胞（包括分支），细胞体，和细胞核的体积;的总长度和分支的数目;用于星形细胞抗体检测的荧光强度;和星形胶质细胞的密度（个/ 1000微米2）。为了这个目的，我们使用脑切片从大鼠暴露于海马内注射Aβ1-40的含或不含染料木黄酮处理作为抗炎物质。所描述的协议可以用于形态的alysis 在体外或体内在不同条件下的不同细胞类型。
Protocol
Representative Results
Discussion
在目前的协议，我们采用三维激光共聚焦形态来评估与星形胶质细胞形态进行了相关的12个不同的参数。为了这个目的，大鼠Aβ1-40的海马组织–诱导的星形胶质细胞增生，有或没有染料木素预处理作为抗炎剂被使用。通过使用3D图像和形态的软件，我们能够表明染料木黄酮对星形胶质细胞增生，即星形胶质细胞形态的影响。
变化的脑组织的细胞内和?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Amyloid beta 1-40 | Sigma Aldrich | 79793 | Keep in -70 °C |
| Genistein | Sigma Aldrich | 446-72-0 | keep in -20 °C |
| polycolonal rabbit antibodies against glial fibrillary acidic protein | DAKO | Z0334 | |
| alkaline phosphate-conjugated swine anti-rabbit IgG antibodies | DAKO | ||
| Liquid Permanent Chromogen | DAKO | K0640 | |
| Liquid permanent Red Substrate Buffer | DAKO | K0640 | |
| Cremophor EL | Sigma Aldrich | 27963 | Polyethoxylated castor oil – Step 1.1 |
| LSM 700 Confocal Laser Scanning Microscopy | Carl Zeiss | ||
| Volocity 6.3 | Perkin Elmer Inc., | ||
| Image Analysis 2000 | Tekno Optic | ||
| Streotaxic apparatus | Stoelting | ||
| Graph pad Prism 5 | Graph pad software Inc. |
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