Overview
Deze video beschrijft de techniek van het isoleren van de darm om de intestinale opname van bioactieve stoffen te evalueren. In dit monster isoleren we de darm van een volwassen zebravis om de opname van immunostimulantia te analyseren.
Protocol
1. Zebravis Darm dissectie
- Na een bepaalde periode na intubatie(bijv. 5 uur en/of 24 uur) plaatst u de vis met een net in 300 mg/L ethyl 3-aminobenzoaatmethaansulfaatoplossing (MS-222) voor euthanasie. Zorg ervoor dat het operculum stopt met bewegen en dat er geen staartknijpreflex is. Vijf minuten is normaal gesproken voldoende.
- Pak het geëuthanaseerde dier op met een net en leg het op een filterpapier.
OPMERKING: Het filterpapier is erg handig voor het verwijderen van het kleefweefsel langs de darm. - Maak met een scherpe dissectieschaar een halfronde incisie van de anus naar het operculum en open de incisie met een fijn pincet. Snijd beide uiteinden van de darm, haal alle inwendige organen eruit en plaats ze op het filterpapier.
LET OP: Werk snel om het celmetabolisme en de dood te verminderen.
OPMERKING: U kunt ook het kleefweefsel in PBS en op ijs verwijderen. - Scheid de darm van interne organen en zorg ervoor dat de oriëntatie behouden blijft (voorste tot achterste darmsegment) en rek deze uit. Meestal is het voorste segment van de darm breder dan het achterste segment. Zorg ervoor dat u de hele darm krijgt bij het ontleden.
OPMERKING: Het achterste uiteinde is vrij fijn en fragiel bij kleine vissen en kan afbreken, vooral bij dieren <0,7 g. - Rol de darm op het filterpapier met een pincet om het kleefweefsel van de darm los te maken.
- Ga verder met het voorbereiden van de darm op verschillende downstream-analyses
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MS-222 | Sigma Aldrich | E10521 | powder |
| 10x PBS | Sigma Aldrich | P5493 | |
| Filter paper | Filter-Lab | RM14034252 |
