成体ゼブラフィッシュ腸管解剖:化合物吸収を分析する技術

Overview

このビデオでは、生理活性化合物の腸の取り込み評価のために腸を単離する技術について説明します。このサンプルでは、成人のゼブラフィッシュから腸を分離し、免疫刺激剤の取り込みについて分析します。

Protocol

1. ゼブラフィッシュ腸管解剖

1. 指定した期間の挿管後(例えば、5時間および/または24時間)、網を使用して魚を300mg/Lエチル3アミノ安息香メタンスルホン酸(MS-222)溶液に入れて安楽死にします。オペルキュラムが動きを止め、尾のピンチ反射がないことを確認してください。通常は5分で十分です。
2. 安楽死させた動物を網で拾い、ろ紙の上に置きます。
   注: フィルターペーパーは腸に沿って粘着組織を除去するのに非常に有用である。
3. 鋭利な解剖はさみを使用して、細かいピンセットを使用して、アヌスからオーペルキュラムへの半円形切開と開いた切開を行います。腸の両端を切り、すべての内臓を取り出し、濾紙の上に置きます。
   注意: 細胞の代謝と死を減らすために迅速に作業します。.
   注: あるいは、PBSおよび氷上の接着組織を除去する。
4. 腸を内臓から分離し、その向きを保つようにし(後腸セグメントの前部)、それを伸ばします。通常、腸の前部は後部セグメントよりも広い。解剖時に全ての腸を手に入れるのに注意してください。
   注: 後端は小さな魚では非常に細かく壊れやすいし、特に動物<0.7gで壊れる可能性があります。
5. 粘着組織を腸から切り離すために、フィルター紙の上で腸をピンセットで転がします。
6. 様々な下流分析のために腸を準備するために進む

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	powder
10x PBS	Sigma Aldrich	P5493
Filter paper	Filter-Lab	RM14034252