Adult Zebrafish Darm-Sektion: Eine Technik zur Analyse der zusammengesetzten Absorption

Overview

Dieses Video beschreibt die Technik der Isolierung des Darms, um die Darmaufnahme von bioaktiven Verbindungen zu bewerten. In dieser Probe werden wir den Darm von einem erwachsenen Zebrafisch isolieren, um die Aufnahme von Immunstimulanzien zu analysieren.

Protocol

1. Zebrafisch Darm-Sektion

1. Nach einer bestimmten Zeit nach der Intubation(z. B. 5 h und/oder 24 h) den Fisch mit einem Netz in 300 mg/L Ethyl3-Aminobenzoat-Methansulfonatlösung (MS-222) für die Euthanasie geben. Stellen Sie sicher, dass sich das Operculum nicht mehr bewegt und es keinen Schwanzpinch-Reflex gibt. Fünf Minuten sind in der Regel ausreichend.
2. Nehmen Sie das eingeschläferte Tier mit einem Netz auf und legen Sie es auf ein Filterpapier.
   HINWEIS: Das Filterpapier ist sehr nützlich, um das Klebegewebe entlang des Darms zu entfernen.
3. Mit scharfen Sezierscheren einen halbkreisförmigen Schnitt vom Anus zum Operculum und offenen Schnitt mit feiner Pinzette machen. Schneiden Sie beide Enden des Darms, nehmen Sie alle inneren Organe heraus und legen Sie sie auf das Filterpapier.
   ACHTUNG: Arbeiten Sie schnell, um den Zellstoffwechsel und den Tod zu reduzieren.
   HINWEIS: Alternativ können Sie das Klebegewebe in PBS und auf Eis entfernen.
4. Trennen Sie den Darm von inneren Organen und achten Sie darauf, seine Orientierung zu halten (vordere bis hintere Darmsegmente) und dehnen Sie ihn aus. In der Regel ist das vordere Segment des Darms breiter als das hintere Segment. Achten Sie darauf, den gesamten Darm beim Sezieren zu erhalten.
   HINWEIS: Das hintere Ende ist bei kleinen Fischen recht fein und zerbrechlich und kann insbesondere bei Tieren <0,7 g abbrechen.
5. Den Darm mit einer Pinzette auf das Filterpapier rollen, um das Klebegewebe aus dem Darm zu lösen.
6. Fahren Sie fort, den Darm für verschiedene nachgelagerte Analysen vorzubereiten

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	powder
10x PBS	Sigma Aldrich	P5493
Filter paper	Filter-Lab	RM14034252