Dissezione dell'intestino zebrafish adulto: una tecnica per analizzare l'assorbimento composto

Overview

Questo video descrive la tecnica di isolamento dell'intestino per valutare l'assorbimento intestinale dei composti bioattivi. In questo campione, isoliamo l'intestino da un pesce zebra adulto per analizzare l'assorbimento degli immunostimolanti.

Protocol

1. Dissezione dell'intestino di Zebrafish

1. Dopo un determinato periodo di tempo dopo l'intubazione(ad esempio, 5 ore e/o 24 ore), mettere il pesce utilizzando una rete in soluzione di 300 mg/L etile 3-amminobenzoato metanosolfonato (MS-222) per l'eutanasia. Assicurarsi che l'opercolo smetta di muoversi e che non vi sia alcun riflesso di avvicinamento delle dita della coda. Cinque minuti sono normalmente sufficienti.
2. Prendi l'animale eutanasiato con una rete e mettilo su una carta da filtro.
   NOTA: La carta filtrante è molto utile per rimuovere il tessuto adesivo lungo l'intestino.
3. Utilizzando forbici a dissezione affilate, fare un'incisione semicircolare dall'ano all'opercolo e aprire l'incisione usando pinzette fini. Tagliare entrambe le estremità dell'intestino, estagliare tutti gli organi interni e posizionarli sulla carta da filtro.
   ATTENZIONE: Lavora rapidamente per ridurre il metabolismo cellulare e la morte.
   NOTA: In alternativa, rimuovere il tessuto adesivo in PBS e sul ghiaccio.
4. Separare l'intestino dagli organi interni assicurandosi di mantenere il suo orientamento (segmento intestinale anteriore a posteriore) e allungarlo. Di solito, il segmento anteriore dell'intestino è più largo del segmento posteriore. Fare attenzione ad ottenere tutto l'intestino durante la sezionazione.
   NOTA: L'estremità posteriore è abbastanza fine e fragile nei piccoli pesci e può staccarsi, in particolare negli animali <0,7 g.
5. Arrotolare l'intestino sulla carta filtrante con una pinzetta per staccare il tessuto adesivo dall'intestino.
6. Procedere alla preparazione dell'intestino per varie analisi a valle

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	powder
10x PBS	Sigma Aldrich	P5493
Filter paper	Filter-Lab	RM14034252