Summary
هنا ، نصف تحديد رهوديولا كرينولاتا من الموائل ، ومورفولوجيا النبات ، والخصائص الطبية ، والسمات المجهرية ، وكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة.
Abstract
تحديد المواد الطبية هو فرضية وضمان سلامة المخدرات. لا بد أن يفضل غالبية الباحثين العلميين عملية تحديد الأعشاب البسيطة والسريعة والفعالة وغير المكلفة. رهوديولا كرينولاتا هو دواء تبتي تقليدي يزرع على ارتفاعات عالية ، ويتم توزيعه بشكل رئيسي في مناطق التبت ويونان وسيتشوان في الصين. تمتلك رهوديولا كرينولات أنشطة حيوية متعددة ، مثل الخصائص المضادة للالتهابات والمضادة لنقص الأكسجة ومضادات الأكسدة ، ولديها إمكانات كبيرة للتنمية. مع زيادة الطلب في السوق والانخفاض السريع في محتوى الموارد ، كان عدد كبير من المنتجات المشوشة من رهوديولا crenulata يزعج الناس. لذلك ، يقدم هذا البروتوكول عملية قياسية لتحديد رهوديولا كرينولاتا في الحقل جنبا إلى جنب مع الاختبارات المعملية الروتينية. إن الجمع بين الموائل والميزات المجهرية والكروماتوغرافيا ذات الطبقة الرقيقة سيحدد بلا شك رهوديولا كرينولاتا بسرعة وكفاءة واقتصادية ، مما يساهم في التطوير المستمر للطب التبتي ومراقبة جودة المواد الطبية.
Introduction
يتمتع طب الأعشاب بتاريخ طويل وخبرة تطبيقية غنية في الصين ، وكان أول تسجيل منهجي في Shennong's herbal classic1. عزز اكتشاف الأرتيميسينين المطبق على الملاريا تطوير الأدوية العشبية إلى مرحلة جديدة1. إن استخدام التكنولوجيا العلمية الحديثة للكشف عن الآلية الدقيقة للأدوية العشبية يزيد من معدل الاستخدام والطلب على الأدوية العشبية ، مما يفتح سوقا دوليا جديدا لها2،3،4. ومع ذلك ، فقد أدى هذا إلى سلسلة من الآثار السلبية. غير المتخصصين لديهم فهم غامض لخصائص الأدوية العشبية ، مما يجعل استخدام الأدوية العشبية يواجه خطرا كبيرا على السلامة5.
رهوديولا كرينولاتا ، أحد نباتات أنواع رهوديولا ، يتوزع بشكل رئيسي في التبت وشمال غرب يونان وغرب سيتشوان في الصين (الشكل 1)6,7. تتكون رهوديولا كرينولاتا من ساليدروسيد ، تيروسول ، حمض الغال ، ومركبات أخرى لعلاج الأمراض المرتبطة بنقص الأكسجين من خلال وظيفة "تنشيط تشي وتعزيز الدورة الدموية ، وتطهير النبض وتهدئة الربو"8،9،10،11. يظهر التحقيق الميداني أنه يمكن العثور على رهوديولا كرينولاتا في مناطق الكاحل الألبية ومنحدرات الأخاديد والشقوق الصخرية على ارتفاع 4000-5600 متر. بيئتها المتنامية باردة ومليئة بأشعة الشمس والإشعاع الشديد ، وتنتمي إلى النظام البيئي لمروج جبال الألب. يمكن توزيع رهوديولا كرينولاتا في مجموعات صفائحية وشبيهة بالنقاط وفقا لتضاريس النمو ، ويمكن إجراء تدفق الجينات من خلال التلقيح المتبادل.
إن إجهاض حبوب اللقاح من جنس رهوديولا ، والتنقيب غير القانوني ، والبيئة البيئية المتدهورة تجعل رهوديولا كرينولاتا من الأنواع المهددة بالانقراض 6,12. نظرا للقيمة الطبية العالية لرهوديولا كرينولاتا ، من المتوقع أن تتدفق المنتجات المقلدة إلى السوق. تقدم هذه المقالة موطن رهوديولا كرينولاتا وبعض طرق تحديد المختبر المريحة. أولا ، لاحظنا بيئة نمو رهوديولا كرينولاتا وخصائصها الطبية. ثانيا ، لوحظ المجهرية للمسحوق الطبي بواسطة المجهر. الخطوة الأخيرة هي النقطة الأساسية. تم فصل المكونات التمثيلية لرهوديولا كرينولاتا وتحديدها وفقا لخصائص الامتزاز أو الذوبان المختلفة لهذه المكونات في مادة معينة. المصادقة القائمة على الحمض النووي أو طرق تحليل الأيض للنباتات الطبية معقدة ومكلفة13. يمكن لهذه الطرق الأساسية والمريحة والاقتصادية التعرف بسرعة على رهوديولا كرينولاتا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
يتم جمع رهوديولا كرينولاتا من جبل Zhuoda Snow ، مقاطعة Ganzi ، محافظة Ganzi التبتية ذاتية الحكم ، مقاطعة سيتشوان ، الصين (N 31.44570 ° ، E 99.96086 ° ، 4892 م). تم اعتماد النباتات على أنها أصلية من قبل البروفيسور يي تشانغ في كلية الطب العرقي ، جامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي.
1. مجموعة من رهوديولا كرينولاتا
- صور خريطة الموائل رهوديولا كرينولاتا.
- صور النبات بأكمله ، والأوراق ، والكأس ، وجذمور رهوديولا كرينولاتا.
- استخدم الأشياء بأسمائها الحقيقية لإزالة الأعشاب الضارة والأحجار المكسورة على بعد 1 متر من رهوديولا كرينولاتا لضمان التعدين السلس اللاحق.
- حفر التربة مع مجرفة حتى يتم رؤية جذري كامل وجمع الجذر.
ملاحظة: يجب جمع جذور وجذور رهوديولا كرينولاتا المستخدمة في الأجزاء الطبية في الخريف ، عندما تذبل الزهرة.
2. تحديد مميز
- راقب سمات مظهر رهوديولا كرينولاتا بالعين المجردة: جذور وجذور أسطوانية وقصيرة ، سطح بني ، بشرة صفراء غشائية بنمط وردي ، وشرائح برتقالية حمراء أو بورجوندي.
- التعرف عليه عن طريق الرائحة: يعطي رائحة عطرة عندما يكون بالقرب من الأنف.
- حدده حسب الذوق: خذ قطعة صغيرة من الجذر في الفم ، ورشفها أولا ثم امضغها ، وتذوقها مريرة قليلا ، ثم حلوة.
3. التحديد المجهري لحبيبات النشا في مسحوق طبي
- قم بإزالة التربة الموجودة على سطح رهوديولا كرينولاتا بفرشاة ، وضعها في الفرن على حرارة 40 درجة مئوية ، واقلب الأعشاب كل 24 ساعة.
ملاحظة: تعتبر سهولة تكسير المواد الطبية معيارا لتجفيف الرطوبة. - قم بمسحوق المواد الطبية المجففة باستخدام آلة المسحوق وقم بتصفية المسحوق الطبي باستخدام المنخل الطبي رقم 3 (انظر جدول المواد).
- خذ شريحة نظيفة (انظر جدول المواد) ، وحفر المسحوق بإبرة تشريح (انظر جدول المواد) ، وضعه بالتساوي في ثلث الشريحة في حدود 2 مم.
- استخدم قطارة زجاجية (انظر جدول المواد) لإضافة قطرة من الماء منزوع الأيونات إلى المسحوق. استخدم ملقط (انظر جدول المواد) لتثبيت أحد طرفي زجاج الغطاء (انظر جدول المواد) للمس مستوى السائل بسرعة وتغطية المسحوق.
ملاحظة: استخدم إبرة تشريحية لخلط الماء والمسحوق الطبي برفق لضمان خلط العينات بشكل موحد. يجب ألا تكون هناك فقاعات هواء بين الشريحة والمسحوق وغطاء الزجاج. - افتح المجهر (انظر جدول المواد) وضع الشريحة في الخطوة 3.4 على المنصة لتثبيتها. اضبط مصدر الضوء ودوامة التركيز الخشنة لرؤية المسحوق. اضبط اللولب شبه البؤري الدقيق حتى ترى الأنسجة بوضوح. قم بالتبديل إلى هدف 40x وراقب حبيبات النشا.
ملاحظة: نشا الحبوب التي تظهر على شكل حبيبات مفردة أو متعددة ، وتظهر النقطة السرية متعرجة أو على شكل صدع.
4. التحديد المجهري للقسطرة وخلايا الفلين والألياف وخلايا حمة الخشب والكتل الصبغية في مسحوق طبي
- خذ شريحة نظيفة (انظر جدول المواد) ، واحفر المسحوق بإبرة تشريح (انظر جدول المواد) ، وضعه في ثلث الشريحة.
- استخدم قطارة زجاجية (انظر جدول المواد) لإضافة قطرة من هيدرات الكلورال (انظر جدول المواد) إلى المسحوق. خذ الشريحة بملقط (انظر جدول المواد) وقم بتسخينها في مصباح الكحول ثلاث مرات ، في كل مرة لمدة 1 ثانية.
ملاحظة: يجب تجنب الفقاعات أثناء التسخين. يبقى السائل غير متدفق ، مما يشير إلى اكتمال الاختراق. - استخدم قطارة زجاجية لإضافة قطرة من الجلسرين (انظر جدول المواد). استخدم ملقط لتثبيت أحد طرفي غطاء الزجاج للمس مستوى السائل بسرعة.
- افتح المجهر وضع الشريحة على المنصة لتثبيتها. اضبط مصدر الضوء ودوامة التركيز الخشنة لرؤية المسحوق. اضبط اللولب شبه البؤري الدقيق حتى ترى الأنسجة بوضوح. راقب القسطرة وخلايا الفلين والألياف وخلايا النسيج البرنشيمي الخشبي وكتلة الصباغ عن طريق التبديل إلى عدسة موضوعية 40x.
ملاحظة: مضلع أو طويل الأضلاع لخلايا الفلين ، وعاء حلزوني ذو بنية حلزونية واضحة ، حمة نسيج الخشب تحتوي على بلورات رمل أكسالات الكالسيوم ، وكتلة صبغة حمراء أو بنية حمراء.
5. تحضير عينات كروماتوغرافية رقيقة الطبقة (TLC) من رهوديولا كرينولاتا ومرجعها
- ضع ورق الوزن على الميزان (انظر جدول المواد) وقم بوزن 3 جم من مسحوق رهوديولا كرينولاتا.
- خذ المسحوق في زجاجة مخروطية سعة 100 مل (انظر جدول المواد) ، وأضف 25 مل من الميثانول مع ماصة بطن كبيرة (انظر جدول المواد). ضع الزجاجة المخروطية في أداة الموجات فوق الصوتية. اضبط الطاقة على 250 واط ، والتردد على 40 كيلو هرتز ، والوقت على 30 دقيقة (انظر جدول المواد) ، وقم بتشغيل الجهاز.
ملاحظة: الغرض من أداة الموجات فوق الصوتية هو التأكد من إذابة مسحوق رهوديولا كرينولاتا تماما دون التأثير على نتائج التجارب الكروماتوغرافية اللاحقة للطبقة الرقيقة. - قم بإزالة الزجاجة المخروطية وشطف الزجاجة الخارجية بالماء الجاري إلى درجة حرارة الغرفة (RT).
- نضح 800 ميكرولتر من السائل المحضر في الخطوة 5.3 باستخدام حقنة 1 مل. قم بالترشيح باستخدام غشاء مرشح صغير يسهل اختراقه 0.22 ميكرومتر (انظر جدول المواد) واجمع 400 ميكرولتر من محلول عينة منتصف مجرى الطريق من رهوديولا كرينولاتا في زجاجة عينة كروماتوغرافية.
- قم بوزن وإضافة 2 مجم من الساليدروسيد والتيروسول وحمض الغال (انظر جدول المواد) في 3 زجاجات مخروطية منفصلة سعة 100 مل ، على التوالي. أضف 25 مل من الميثانول مع ماصة بطن كبيرة في كل زجاجة مخروطية.
- ضع الزجاجة المخروطية في أداة الموجات فوق الصوتية ، واضبط الطاقة على 250 واط ، والتردد على 40 كيلو هرتز ، والوقت على 30 دقيقة ، وكرر الخطوة 5.3 (انظر جدول المواد).
- نضح 800 ميكرولتر من السائل المحضر في الخطوة 5.6 باستخدام حقنة سعة 1 مل. قم بالتصفية باستخدام غشاء مرشح صغير يسهل اختراقه 0.22 ميكرومتر (انظر جدول المواد) واجمع 400 ميكرولتر من محلول ساليدروسيد والتيروسول وحمض الغال القياسي في زجاجات العينات الكروماتوغرافية المقابلة.
6. تحديد TLC
- ماصة ثلاثي كلورو الميثان (5 مل) ، أسيتات الإيثيل (4 مل) ، ميثانول (2 مل) ، وحمض الفورميك (0.5 مل) (انظر جدول المواد). أضف إلى جانب واحد من أسطوانة الكروماتوغرافيا ذات الخزان المزدوج (انظر جدول المواد) ، رجها ، واخلطها بالتساوي. قم بتغطية رأس الأسطوانة العلوي.
- ضع حمض الغال ، والساليدروسيد ، والمحلول القياسي للتيروسول ، ومحلول رهوديولا كرينولاتا على رف العينة في المواضع A1-A4.
- ضع لوح السيليكون مقاس 5 سم × 10 سم (انظر جدول المواد) على طاولة أخذ العينات. ابدأ تشغيل آلة أخذ العينات الأوتوماتيكية (انظر جدول المواد) ، وافتح صمام التحكم في الهواء.
- افتح برنامج visionCATS (انظر جدول المواد). انقر فوق مجلد جديد > جديد (يسمى اختبار عينة رهوديولا crenulata ) > موافق. انقر فوق طريقة جديدة (اسم اختبار عينة رهوديولا كرينولاتا ) > موافق > ATS 4.
- انقر فوق تعريف خطوة الإنهاء. انقر فوق تعقب المهمة لتحرير الوصف (عينة حمض الغال والساليدروسيد والتيروسول ورهوديولا كرينولاتا ).
- انقر فوق خطوات HPTLC. اضبط معلمات الطبقة الرقيقة (5 سم × 10 سم). حدد نوع التطبيق (النطاق) ، واضبط المعلمات (الجدول 1) ، وانقر فوق OK .
- فتح جودة التعبئة / الشطف. حدد ملء وحدة التخزين المبرمجة فقط. اضبط المستوى السفلي للقارورة (مم) على 0.5 ، وانقر فوق OK .
- انقر فوق طريقة التنفيذ.
- انقر فوق الزر تعقب التعيين ، وتحقق من المركز ، وقم بتعيين المعلمات (الجدول 2).
- انقر فوق الزر "متابعة " لأخذ العينات تلقائيا.
- قم بإيقاف تشغيل آلة أخذ العينات الأوتوماتيكية وصمام الهواء. قم بإزالة لوح السيليكون من آلة أخذ العينات الأوتوماتيكية.
- ضع لوح السيليكون في الجانب الآخر من أسطوانة كروماتوغرافيا الخزان المزدوجة في الخطوة 6.1 ، وقم بتغطية رأس الأسطوانة العلوي ، وقم بالتشبع المسبق لمدة 20 دقيقة.
- قم بتثبيت الطرف العلوي من لوحة الطبقة الرقيقة برفق باستخدام ملقط ، ثم ضع لوح السيليكون بسرعة في عامل التطوير ، وقم بتغطية رأس الأسطوانة العلوي.
ملاحظة: أخرج لوح السيليكون عندما تكون الحافة الأمامية التي تتكشف على بعد 0.5-1.0 سم من الطرف العلوي للوحة الطبقة الرقيقة. - بعد أن يتبخر المذيب العضوي ، قم برش المحلول الكروموجيني على سطح لوح السيليكون في درجة حرارة الغرفة للحصول على نتائج كروموجينية.
ملاحظة: المحلول الكروموجيني عبارة عن محلول مائي يحتوي على 2٪ FeCl3 و 1٪ K3 [Fe (CN) 6].
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
يصف هذا البروتوكول التجريبي تحديد وجمع كرينولات رهوديولا في الحقل. يميل كرينولات رهوديولا إلى العيش في مناطق الكاحل الألبية ومنحدرات الأخاديد والشقوق الصخرية على ارتفاعات عالية. يمكن توضيح موطن كرينولات رهوديولا ونباتها الكاملة وأزهارها وأوراقها في الشكل 2. رهوديولا crenulate لديه جذمور بني محمر (الشكل 3 أ). تظهر صورة تمثيلية للمسحوق الطبي في الشكل 3 ب. وفقا للبروتوكول التجريبي أعلاه ، يمكن سرد النتائج المجهرية على النحو التالي: 1) خلايا الفلين الصفراء أو عديمة اللون ، مظهر كبير ، متعدد الأضلاع أو طويل الأضلاع ، مع جدران أكثر سمكا قليلا (الشكل 3C) ؛ 2) حبيبات النشا التي تظهر على شكل حبيبات مفردة أو متعددة ، ونقطة سرية تظهر متعرجة أو على شكل صدع (الشكل 3 د) ؛ 3) الأوعية الحلزونية بشكل رئيسي مرتبة بشكل وثيق (الشكل 3E) ؛ 4) حمة نسيج الخشب اللونية والبيضاوية التي تظهر في صفائح وتحتوي على بلورات رمل أكسالات الكالسيوم (الشكل 3F) ؛ 5) كتلة صبغة بنية حمراء غير منتظمة الشكل (الشكل 3G). أظهرت نتائج فصل الطبقة الرقيقة أن عينة رهوديولا كرينولاتا (A4) ظهرت كبقع من نفس اللون في الموضع المقابل للكروماتوجرام لحمض الغال (A1) ، ساليدروسيد (A2) ، محلول التيروزول القياسي (A3) (الشكل 3H). حمض الغال ، ساليدروسيد ، والتيروسول هي المكونات الرئيسية والتمثيلية لكرينولات رهوديولا. تظهر هذه النتائج أن التحديد الأولي لرهوديولا كرينولاتا ممكن من خلال الاختبارات التي تمت مناقشتها في البروتوكول.
الشكل 1: خريطة توزيع رهوديولا كرينولاتا. (أ) تتوزع رهوديولا كرينولاتا بشكل أساسي في الصين والهند ونيبال وبوتان14. (ب) يتم توزيع رهوديولا كرينولاتا بشكل أساسي في التبت وتشينغهاي وسيتشوان ويونان وقويتشو الصينية (التي تنتجها ArcGis 10.6 الناعمة). تأتي البيانات الإحصائية من مواقع معهد علم النبات15,16. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: صورة نبات رهوديولا كرينولاتا . أ: البيئة الحيوية لكرينولات الروديولا. (ب) لقطة قريبة من كرينولات رهوديولا. ج: نبات رهوديولا كرينولات كامل. د: زهرة رهوديولا كرينولاتا. ه: أوراق رهوديولا كرينولات. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: الخواص المجهرية ومخطط كروماتوجرام الطبقة الرقيقة لرهوديولا كرينولاتا. أ: الجذر الطبي للرهوديولا كرينولاتا. (ب) قوة المواد الطبية للرهوديولا كرينولاتا. ج: خلية الفلين. د: حبيبات النشا. (ه) وعاء حلزوني. (F) حمة نسيج الخشب (بلورات أكسالات الكالسيوم). (ز) الصباغ. (H) فصل كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة للساليدروسيد (A1) وحمض الغال (A2) والتيروسول (A3) ورهوديولا كرينولاتا (A4). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| البارامترات | خيار |
| موضع التطبيق Y (مم) | 10 |
| موضع المسار الأول (مم) | 10 |
| مسافة المسار (مم) | 10 |
| طول التطبيق (مم) | 5 |
| عرض التطبيق (مم) | 0.5 |
الجدول 1: إعدادات المعلمات لموضع أخذ العينات التلقائي.
| معرف القارورة | وصف | الحجم (ميكرولتر) | موضع | نوع |
| 1 | ساليدروسيد | 3 | أ 1 | مرجع |
| 11 | حمض الغال | 1 | أ 2 | مرجع |
| 12 | تيروسول | 2 | أ 3 | مرجع |
| 13 | رهوديولا كرينولات عينة | 2 | أ 4 | عينة |
الجدول 2: إعدادات المعلمات لترتيب أخذ العينات التلقائي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
هناك أكثر من 90 نوعا من نباتات رهوديولا في العالم ، وأكثر من 60٪ من جميع الأنواع موجودة في الصين ، وهي أنواع شائعة بما في ذلك رهوديولا كرينولاتا ، رهوديولا الوردية ، رهوديولا أخالينينسيس ، ورهوديولا ألجيدا17. رهوديولا كرينولاتا ، المسجلة في الجزء الأول من دستور الأدوية الصيني (2020) ، هو دواء تبتي تقليدي يزرع على ارتفاعات عالية. يتزايد الطلب في السوق على رهوديولا كرينولاتا سنويا ، لذا فإن ضمان الاستخدام الصحيح للمصدر هو المفتاح لضمان الاستخدام الآمن. على وجه الخصوص ، لا يمكن تجاهل التوحيد القياسي من الانتقاء الميداني إلى التحديد الروتيني البسيط والسريع للمختبر. تم الإبلاغ عن أن اللوني السائل عالي الأداء ، وقياس الطيف الكتلي ، وتكرار التسلسل البسيط يمكن أن يحدد بدقة كرينولات رهوديولا من أنواع رهوديولا الأخرى ، وهو أمر يستغرق وقتا طويلا ومعقدا ومكلفا18،19،20. وفي الوقت نفسه ، أنشأنا طريقة تقييم متعددة الأبعاد للتعرف الحسي (الأنف الإلكتروني وتحليل اللون) وطريقة HPLC لتمييز رهوديولا كرينولات21,22.
كل مادة طبية لها بيئتها المتنامية الفريدة وخصائص البنية المجهرية ومكونات الفهرس. يوفر هذا البروتوكول طريقة شاملة لتحديد رهوديولا كرينولاتا ، من التحديد الميداني إلى الفحص المجهري المختبري والتحقق من الصحة باستخدام كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة. تنمو رهوديولا كرينولاتا بشكل رئيسي على ارتفاعات أكبر من 3000 متر ، ودرجة حرارة منخفضة ، وأكسجين منخفض ، ومناطق عالية من الأشعة فوق البنفسجية23. رهوديولا crenulata هو عشب عصاري ، وهو ميزة بصرية بديهية. يبدو مسحوقه بني محمر مع رائحة عطرة. بناء على عاداتها ومورفولوجيا النبات والزهور والأوراق ، تتميز رهوديولا كرينولاتا عن أنواع رهوديولا الأخرى في هذا المجال. أظهرت النتائج المجهرية للمواد الطبية وجود حبيبات النشا وخلايا حمة الخشب (بما في ذلك بلورات رمل أكسالات الكالسيوم) وخلايا الفلين والقناة (القناة الملولبة بشكل أساسي) وكميات كبيرة من الصباغ الأحمر. TLC هي تقنية فصل كروماتوغرافية لفصل العينات متعددة المكونات ، وتستخدم عادة في تحديد المواد الطبية الصينية. غالبا ما يتم تحديد حمض الغال والتيروسول والساليدروسيد كمكونات مؤشر لرهوديولا كرينولات24. أظهرت نتائج كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة أن محلول رهوديولا كرينولاتا أظهر نفس بقع اللون في الموضع المقابل مثل التحكم (حمض الغال ، التيروسول ، والساليدروسيد). يظهر أن رهوديولا كرينولاتا تحتوي على حمض الغال والتيروسول والساليدروسيد. جنبا إلى جنب مع معرفة البيئة المتنامية والنتائج المجهرية ، يمكن تحديد رهوديولا كرينولاتا بشكل مبدئي.
تجدر الإشارة إلى أن بيئة النمو الفريدة تحدد أنه يكاد يكون من المستحيل وجود كرينولاتا رهوديولا البرية تحت ارتفاع 3000 متر. بالإضافة إلى ذلك ، لا ينصح بحصاد جذور وجذمور رهوديولا كرينولاتا خلال فترة الإزهار. بالنسبة للتحديد المجهري المختبري ، يعد تجفيف الجذور وغربلة المسحوق من المتطلبات الأساسية للتحضير الناجح للعينات المجهرية. يعد التأكد من عدم وجود فقاعة هواء بين الشريحة والمسحوق الطبي وزجاج الغطاء أمرا أساسيا أيضا لمراقبة التركيب المميز تحت المجهر. بالنسبة لكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، يعد التشبع المسبق للوحة هلام السيليكا ، وعامل التطوير المعقول ، وتركيز العينة من العوامل المهمة لفصل المكونات المختلفة بنجاح في عينة الاختبار. بالمقارنة مع أخذ العينات اليدوية التقليدية ، فإن عملية أخذ العينات التلقائية لهذا البروتوكول تزيد بلا شك من دقة النتائج وتكرار التجربة. إن ذاتية تحديد الرائحة والذوق قوية للغاية وقد تؤدي إلى سوء التقدير. بالمقارنة مع الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ، والرنين المغناطيسي النووي H ، وقياس الطيف الكتلي ، لا يمكن لكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة تحليل محتوى المركبات في المواد الطبيةكميا 25. على الرغم من أن الترميز الشريطي للحمض النووي يتمتع بدقة فائقة في تحديد الأعشاب ، إلا أن سعره المرتفع يحدد أنه ليس عالميا في تحديد المواد الطبية26. علاوة على ذلك ، فإن التحديد من حقل إلى مختبر والفحص المجهري جنبا إلى جنب مع تقنية كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة المنصوص عليها في هذا البروتوكول ينطبق على جميع المواد الطبية تقريبا. هذه عملية رخيصة وبسيطة وسريعة لتحديد أي مواد عشبية طبية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
Acknowledgments
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81973569 و 82274207 و 82104533) ، ومشروع تعزيز أبحاث Xinglin Scholar التابع لجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (XKTD2022013) ، وبرنامج البحث والتطوير الرئيسي في نينغشيا (2023BEG02012).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.22 μm millipore filter | Millipore | SLGP033RB | |
| Automatic sampling machine | CAMAG | ATS 4 | |
| Chloral hydrate | Fuzhou Brunei Technology Co., Ltd | ST1002 | |
| Chromatographic sample bottles | Zhejiang ALWSCI Technology Co., Ltd | C0000008 | |
| Conical flask | Sichuan Shubo Co., Ltd | 1121 | |
| Cover glass | Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd | 10211818c | |
| Dissecting needle | Shanghai Bingyu Fluid Technology Co., Ltd | BY-5026 | |
| Electronic balance | SHIMADZU | ATX124 | |
| Ethyl acetate | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 2022120901 | |
| Formic acid | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 2021110801 | |
| Gallic acid | Chengdu Herbpurify Co., Ltd | M-017 | |
| Glycerol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10010618 | |
| High speed crusher | Beijing Zhongxingweiye Instrument Co., Ltd | FW-100 | |
| Methanol | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 20230108 | |
| Microscope | Chongqing Oprec Nistrument Co., Ltd | B203 | |
| Microscope slide | Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd | 7105P-G | |
| Oven | Shanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd | DHG-8145 | |
| Pharmacopoeia sieve | Hangzhou Xingrun sieve factory | 572423281330 | |
| Pipette | Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd | 120302008 | |
| Salidroside | Chengdu Herbpurify Co., Ltd | H-040 | |
| Saturate tank | Yancheng Liegu Technology Co., Ltd | 10*20 P-1 | |
| Silica gel plate | Yantai Jiangyou Silica Gel Development Co., Ltd | HSG20211227 | |
| Trichloromethane | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 20221013-1 | |
| Tweezer | Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd | 130302027 | |
| Tyrosol | Chengdu Herbpurify Co., Ltd | L-042 | |
| Ultrasound equipment | Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd | SB-8200DTS | |
| Volumetric pipet | Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd | 120301006 |
References
- Zhang, J., et al. Traditional herbal medicine and nanomedicine: Converging disciplines to improve therapeutic efficacy and human health. Advanced Drug Delivery Reviews. 178, 113964 (2021).
- Yin, R., et al. The positive role and mechanism of herbal medicine in Parkinson's Disease. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 9923331 (2021).
- Li, F. S., Weng, J. K. Demystifying traditional herbal medicine with modern approach. Nature Plants. 3, 17109 (2017).
- da Fonseca, L. R., et al. Herbal medicinal products from Passiflora for anxiety: An unexploited potential. The Scientific World Journal. 2020, 6598434 (2020).
- Aziato, L., Antwi, H. O. Facilitators and barriers of herbal medicine use in Accra, Ghana: an inductive exploratory study. BMC Complementary and Alternative Medicine. 16, 142 (2016).
- Tao, H., et al. Rhodiola species: A comprehensive review of traditional use, phytochemistry, pharmacology, toxicity, and clinical study. Medicinal Research Reviews. 39 (5), 1779-1850 (2019).
- Wang, Y., et al. The dietary supplement Rhodiola crenulata extract alleviates dextran sulfate sodium-induced colitis in mice through anti-inflammation, mediating gut barrier integrity and reshaping the gut microbiome. Food & Function. 12 (7), 3142-3158 (2021).
- Xie, N. Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-κB/NLRP3-mediated inflammation. Phytomedicine. 103, 154240 (2022).
- Wang, X., et al. Salidroside, a phenyl ethanol glycoside from Rhodiola crenulata, orchestrates hypoxic mitochondrial dynamics homeostasis by stimulating Sirt1/p53/Drp1 signaling. Journal of Ethnopharmacology. 293, 115278 (2022).
- Ma, D., et al. Chemical characteristics of Rhodiola Crenulata and its mechanism in acute mountain sickness using UHPLC-Q-TOF-MS/MS combined with network pharmacology analysis. Journal of Ethnopharmacology. 294, 115345 (2022).
- Wang, X., et al. Rhodiola crenulata attenuates apoptosis and mitochondrial energy metabolism disorder in rats with hypobaric hypoxia-induced brain injury by regulating the HIF-1α/microRNA 210/ISCU1/2(COX10) signaling pathway. Journal of Ethnopharmacology. 241, 111801 (2019).
- d'Avigdor, E., Wohlmuth, H., Asfaw, Z., Awas, T. The current status of knowledge of herbal medicine and medicinal plants in Fiche, Ethiopia. Journal of Ethnobiology and Ethnomedicine. 10, 38 (2014).
- Sánchez, M., González-Burgos, E., Divakar, P. K., Gómez-Serranillos, M. P. DNA-based authentication and metabolomics analysis of medicinal plants samples by DNA barcoding and ultra-high-performance liquid chromatography/triple quadrupole mass spectrometry (UHPLC-MS). Plants (Basel, Switzerland). 9 (11), 1601 (2020).
- Rhodiola renulata (Hook.fil & Thomson) H.Ohba. , Available from: https://www.gbif.org/species/4200529 (2023).
- Plant + data center. , Available from: https://www.iplant.cn/ (2023).
- Chinese virtual herbarium. , Available from: https://www.cvh.ac.cn/ (2023).
- Cunningham, A. B. There "ain't no mountain high enough"?: The drivers, diversity and sustainability of China's Rhodiola trade. Journal of Ethnopharmacology. 252, 112379 (2020).
- Wang, Q., Ruan, X., Jin, Z. H., Yan, Q. C., Tu, S. Identification of Rhodiola species by using RP-HPLC. Journal of Zhejiang University. Science. B. 6 (6), 477-482 (2005).
- Dong, X., Guo, Y., Xiong, C., Sun, L. Evaluation of two major Rhodiola species and the systemic changing characteristics of metabolites of Rhodiola crenulata in different altitudes by chemical methods combined with UPLC-QqQ-MS-based metabolomics. Molecules. 25 (18), 4062 (2020).
- Zhao, W., et al. HPLC fingerprint differentiation between natural and ex situ populations of Rhodiola sachalinensis from Changbai Mountain, China. PloS One. 9 (11), 112869 (2014).
- Yu, Y. Y. Quality evaluation of Tibetan medicine Rhodiolae crenulatae radix et rhizome based on sensory recognition and near infrared spectrum analysis. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. , Chinese Master's Thesis (2020).
- Lv, X. M. Simultaneous determination of 5 chemical components in 3 kinds of Rhodiola rosea by HPLC. China Pharmacy. 29 (18), 2515-2519 (2018).
- Dong, T., Sha, Y., Liu, H., Sun, L. Altitudinal variation of metabolites, mineral elements and antioxidant activities of Rhodiola crenulata (Hook.f. & Thomson) H.Ohba. Molecules. 26 (23), 7383 (2021).
- Ma, D., et al. Application of UHPLC fingerprints combined with chemical pattern recognition analysis in the differentiation of six Rhodiola species. Molecules. 26 (22), 6855 (2021).
- Li, X. H., et al. Metabolic discrimination of different Rhodiola species using 1H-NMR and GEP combinational chemometrics. Chemical & Pharmaceutical Bulletin. 67 (2), 81-87 (2019).
- Liu, Y., et al. Identification of Hippophae species (Shaji) through DNA barcodes. Chinese Medicine. 10, 28 (2015).
