Summary
Hier beschreiben wir die Identifizierung von Rhodiola Crenulata anhand des Lebensraums, der Pflanzenmorphologie, der medizinischen Eigenschaften, der mikroskopischen Merkmale und der Dünnschichtchromatographie.
Abstract
Die Identifizierung von medizinischen Materialien ist die Voraussetzung und Garantie für die Arzneimittelsicherheit. Die Mehrheit der wissenschaftlichen Forscher wird den einfachen, schnellen, effektiven und kostengünstigen Identifizierungsprozess von Kräutern bevorzugen. Rhodiola crenulata ist eine traditionelle tibetische Medizin, die in großen Höhen angebaut wird und hauptsächlich in den Regionen Tibet, Yunnan und Sichuan in China verbreitet ist. Rhodiola-Crenulat besitzt mehrere Bioaktivitäten, wie z. B. entzündungshemmende, antihypoxie- und antioxidative Eigenschaften, und hat ein großes Entwicklungspotenzial. Mit der steigenden Marktnachfrage und einem raschen Rückgang des Ressourcengehalts hat eine große Anzahl verwirrter Produkte von Rhodiola crenulata die Menschen beunruhigt. Daher führt dieses Protokoll ein Standardverfahren für die Identifizierung von Rhodiola crenulata im Feld in Kombination mit routinemäßigen Labortests ein. Die Kombination aus Lebensraum, mikroskopischen Merkmalen und Dünnschichtchromatographie wird Rhodiola crenulata zweifellos schnell, effizient und wirtschaftlich identifizieren und zur kontinuierlichen Entwicklung der tibetischen Medizin und zur Qualitätskontrolle von medizinischen Materialien beitragen.
Introduction
Die Kräutermedizin hat eine lange Geschichte und reiche Anwendungserfahrung in China und war die erste systematische Aufnahme in Shennongs Kräuterklassiker1. Die Entdeckung von Artemisinin bei Malaria förderte die Entwicklung der Kräutermedizin in ein neues Stadium1. Der Einsatz moderner wissenschaftlicher Technologien zur Aufdeckung des genauen Mechanismus der Kräutermedizin erhöht die Nutzungsrate und die Nachfrage nach Kräutermedizin und eröffnet einen neuen internationalen Markt dafür 2,3,4. Dies hat jedoch zu einer Reihe negativer Auswirkungen geführt. Laien haben ein vages Verständnis der Eigenschaften der Kräutermedizin, was die Verwendung von Kräutermedizin zu einem großen Sicherheitsrisiko macht5.
Rhodiola crenulata, eine der Pflanzen der Rhodiola-Arten, ist hauptsächlich in Tibet, im Nordwesten von Yunnan und im westlichen Sichuan Chinas verbreitet (Abbildung 1)6,7. Rhodiola crenulata umfasst Salidrosid, Tyrosol, Gallussäure und andere Verbindungen zur Behandlung hypoxischer Erkrankungen durch die Funktion "belebendes Qi und Förderung der Durchblutung, Puls klärend und Asthma beruhigend"8,9,10,11. Felduntersuchungen zeigen, dass Rhodiola crenulata in den alpinen Schuttzonen, Rinnen und Felsspalten in einer Höhe von 4.000-5.600 m zu finden ist. Ihre Vegetationsumgebung ist kalt, sonnenreich und strahlenintensiv und sie gehört zum Ökosystem der Almwiesen. Rhodiola crenulata kann je nach Wachstumsgelände in lamellären und punktförmigen Populationen verteilt werden, und der Genfluss kann durch Fremdbestäubung erfolgen.
Der Pollenabort der Gattung Rhodiola, die illegale Ausgrabung und die degenerierte ökologische Umwelt machen Rhodiola crenulata zu einer gefährdeten Art 6,12. Angesichts des hohen medizinischen Wertes von Rhodiola crenulata ist zu erwarten, dass gefälschte Produkte auf den Markt kommen. Dieser Artikel stellt den Lebensraum von Rhodiola crenulata und einige praktische Laborbestimmungsmethoden vor. Zunächst beobachteten wir die Wachstumsumgebung von Rhodiola crenulata und ihre medizinischen Eigenschaften. Zweitens wurde die Mikrostruktur des medizinischen Pulvers mikroskopisch beobachtet. Der letzte Schritt ist der entscheidende Punkt. Die repräsentativen Komponenten von Rhodiola crenulata wurden getrennt und nach den unterschiedlichen Adsorptions- oder Auflösungseigenschaften dieser Komponenten in einer bestimmten Substanz identifiziert. DNA-basierte Authentifizierungs- oder Metabolomik-Analysemethoden von Heilpflanzen sind kompliziert und teuer13. Diese einfachen, bequemen und wirtschaftlichen Methoden können Rhodiola crenulata schnell identifizieren.
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Protocol
Rhodiola crenulata wird im Schneeberg Zhuoda im Kreis Ganzi, Tibetische Autonome Präfektur Ganzi, Provinz Sichuan, China (N 31,44570°, E 99,96086°, 4892 m) gesammelt. Die Pflanzen werden von Professor Yi Zhang an der School of Ethnic Medicine der Chengdu University of Traditional Chinese Medicine als echt authentifiziert.
1. Sammlung von Rhodiola crenulata
- Fotografieren Sie die Habitatkarte von Rhodiola crenulata.
- Fotografieren Sie die ganze Pflanze, die Blätter, den Kelch und das Rhizom von Rhodiola crenulata.
- Verwenden Sie einen Spaten, um das Unkraut und die zerbrochenen Steine innerhalb von 1 m um die Rhodiola crenulata zu entfernen, um den anschließenden reibungslosen Abbau zu gewährleisten.
- Graben Sie den Boden mit einer Hacke aus, bis die gesamte Rhizosphäre sichtbar ist, und sammeln Sie die Pfahlwurzel.
HINWEIS: Die Wurzeln und Rhizome von Rhodiola crenulata , die in medizinischen Teilen verwendet werden, sollten im Herbst gesammelt werden, wenn die Blütenstiele verwelken.
2. Identifizierung von Merkmalen
- Beobachten Sie die Erscheinungsmerkmale von Rhodiola crenulata mit bloßem Auge: zylindrische und kurze Pfahlwurzeln und Rhizome, braune Oberfläche, häutige gelbe Epidermis mit rosa Muster und orangerote oder burgunderrote Scheiben.
- Identifizieren Sie es anhand des Geruchs: Es gibt einen duftenden Geruch, wenn es sich in der Nähe der Nase befindet.
- Identifizieren Sie es nach Geschmack: Nehmen Sie ein kleines Stück Wurzel in den Mund, nehmen Sie es zuerst und kauen Sie es dann, schmecken Sie leicht bitter, dann süß.
3. Mikroskopische Identifizierung von Stärkekörnchen in medizinischem Pulver
- Entfernen Sie die Erde von der Oberfläche der Rhodiola crenulata mit einer Bürste, schieben Sie sie bei 40 °C in den Ofen und wenden Sie die Kräuter alle 24 h.
HINWEIS: Die Leichtigkeit des Brechens von medizinischen Materialien gilt als Standard für die Trocknung von Feuchtigkeit. - Pulverisieren Sie die getrockneten medizinischen Materialien mit einer Pulvermaschine und filtern Sie das medizinische Pulver mit dem medizinischen Sieb Nr. 3 (siehe Materialtabelle).
- Nehmen Sie einen sauberen Objektträger (siehe Materialtabelle), graben Sie das Pulver mit einer Präpariernadel (siehe Materialtabelle) und legen Sie es gleichmäßig auf ein Drittel des Objektträgers innerhalb von 2 mm.
- Verwenden Sie eine Glaspipette (siehe Materialtabelle), um dem Pulver einen Tropfen deionisiertes Wasser hinzuzufügen. Halten Sie mit einer Pinzette (siehe Materialtabelle) ein Ende des Deckglases (siehe Materialtabelle), um den Flüssigkeitsstand schnell zu berühren und das Pulver abzudecken.
HINWEIS: Verwenden Sie eine anatomische Nadel, um Wasser und medizinisches Pulver vorsichtig zu mischen, um eine gleichmäßige Probenmischung zu gewährleisten. Es sollten keine Luftblasen zwischen Objektträger, Pulver und Deckglas vorhanden sein. - Öffnen Sie das Mikroskop (siehe Materialtabelle) und legen Sie den Objektträger in Schritt 3.4 auf die Plattform, um ihn zu sichern. Stellen Sie die Lichtquelle und die grobe Fokusspirale ein, um das Pulver zu sehen. Stellen Sie die feine parafokale Spirale ein, bis das Gewebe deutlich zu sehen ist. Wechseln Sie zu einem 40-fachen Objektiv und beobachten Sie die Stärkekörnchen.
HINWEIS: Stärken Sie die Körner, die sich als einzelne oder mehrere Körner präsentieren, und die Nabelschnurspitze erscheint fischgrät- oder rissförmig.
4. Mikroskopische Identifizierung von Kathetern, Korkzellen, Fasern, Holzparenchymzellen und Pigmentmassen in medizinischem Pulver
- Nehmen Sie einen sauberen Objektträger (siehe Materialtabelle), graben Sie das Pulver mit einer Präpariernadel (siehe Materialtabelle) und legen Sie es auf ein Drittel des Objektträgers.
- Verwenden Sie eine Glaspipette (siehe Materialtabelle), um dem Pulver einen Tropfen Chloralhydrat (siehe Materialtabelle) hinzuzufügen. Nehmen Sie den Objektträger mit einer Pinzette (siehe Materialtabelle) und erhitzen Sie ihn dreimal in der Alkohollampe, jedes Mal 1 s lang.
HINWEIS: Blasen sollten beim Erhitzen vermieden werden. Die Flüssigkeit bleibt nicht fließend, was darauf hinweist, dass die Penetration abgeschlossen ist. - Verwenden Sie eine Glaspipette, um einen Tropfen Glycerin hinzuzufügen (siehe Materialtabelle). Halten Sie mit einer Pinzette ein Ende des Deckglases fest, um den Flüssigkeitsstand schnell zu berühren.
- Öffnen Sie das Mikroskop und legen Sie den Objektträger auf die Plattform, um ihn zu sichern. Stellen Sie die Lichtquelle und die grobe Fokusspirale ein, um das Pulver zu sehen. Stellen Sie die feine parafokale Spirale ein, bis das Gewebe deutlich zu sehen ist. Beobachten Sie den Katheter, die Korkzellen, die Fasern, die Holzparenchymzellen und den Pigmentblock, indem Sie zu einer 40-fachen Objektivlinse wechseln.
HINWEIS: Polygonal oder lang polygonal von Korkzellen, spiralförmiges Gefäß mit deutlicher spiralförmiger Struktur, Xylemparenchym mit Calciumoxalat-Sandkristallen und rotem oder bräunlich-rotem Pigmentblock.
5. Herstellung von Dünnschichtchromatographieproben (DC) von Rhodiola crenulata und ihrer Referenz
- Legen Sie das Wiegepapier auf die Waage (siehe Materialtabelle) und wiegen Sie 3 g Pulver Rhodiola crenulata.
- Nehmen Sie das Pulver in eine konische 100-ml-Flasche (siehe Materialtabelle) und fügen Sie 25 mL Methanol mit einer Großbauchpipette hinzu (siehe Materialtabelle). Legen Sie die konische Flasche in das Ultraschallgerät. Stellen Sie die Leistung auf 250 W, die Frequenz auf 40 kHz und die Zeit auf 30 min ein (siehe Materialtabelle) und schalten Sie das Gerät ein.
HINWEIS: Der Zweck des Ultraschallgeräts besteht darin, sicherzustellen, dass das Pulver von Rhodiola crenulata vollständig aufgelöst wird, ohne die Ergebnisse nachfolgender chromatographischer Dünnschichtexperimente zu beeinträchtigen. - Entfernen Sie die konische Flasche und spülen Sie die äußere Flasche mit fließendem Wasser auf Raumtemperatur (RT) aus.
- 800 μl der in Schritt 5.3 hergestellten Flüssigkeit werden mit einer 1-ml-Spritze abgesaugt. Filtern Sie mit einer mikroporösen 0,22-μm-Filtermembran (siehe Materialtabelle) und sammeln Sie 400 μl Midstream-Probenlösung von Rhodiola crenulata in einer chromatographischen Probenflasche.
- Wiegen Sie 2 mg Salidrosid, Tyrosol und Gallussäure (siehe Materialtabelle) und geben Sie sie in 3 separate konische 100-ml-Flaschen. Geben Sie 25 ml Methanol mit einer Pipette mit großem Bauch in jede konische Flasche.
- Setzen Sie die konische Flasche in das Ultraschallgerät, stellen Sie die Leistung auf 250 W, die Frequenz auf 40 kHz und die Zeit auf 30 min ein und wiederholen Sie Schritt 5.3 (siehe Materialtabelle).
- 800 μl der in Schritt 5.6 hergestellten Flüssigkeit werden mit einer 1-ml-Spritze abgesaugt. Filtern Sie mit einer mikroporösen 0,22-μm-Filtermembran (siehe Materialtabelle) und sammeln Sie 400 μl Midstream-Salidrosid-, Tyrosol- und Gallussäure-Standardlösung in entsprechenden chromatographischen Probenflaschen.
6. TLC-Identifizierung
- Pipettieren Sie Trichlormethan (5 ml), Ethylacetat (4 ml), Methanol (2 ml) und Ameisensäure (0,5 ml) (siehe Materialtabelle). Auf eine Seite des Doppeltank-Chromatographiezylinders geben (siehe Materialtabelle), schütteln und gleichmäßig mischen. Decken Sie den oberen Zylinderkopf ab.
- Die Gallussäure, das Salidrosid, die Tyrosol-Standardlösung und die Rhodiola crenulata-Lösung werden in den Positionen A1 bis A4 auf das Probengestell gelegt.
- Legen Sie die 5 cm x 10 cm große Silikonfolie (siehe Materialtabelle) auf den Probenahmetisch. Starten Sie die automatische Probenahmemaschine (siehe Materialtabelle) und öffnen Sie das Luftregelventil.
- Öffnen Sie die Software visionCATS (siehe Materialtabelle). Klicken Sie auf Neu > Neuer Ordner (mit dem Namen Rhodiola crenulata sample test) > auf OK. Klicken Sie auf Neue Methode (Name Rhodiola crenulata sample test) > OK > ATS 4.
- Klicken Sie auf Schrittdefinition beenden. Klicken Sie auf Track-Zuweisung , um die Beschreibung zu bearbeiten (Gallussäure-, Salidrosid-, Tyrosol- und Rhodiola crenulata-Probe ).
- Klicken Sie auf HPTLC-Schritte. Stellen Sie die Parameter für die dünne Schicht ein (5 cm x 10 cm). Wählen Sie Anwendungstyp (Band), legen Sie die Parameter fest (Tabelle 1) und klicken Sie auf die Schaltfläche OK .
- Offene Füll-/Spülqualität. Aktivieren Sie Nur programmiertes Volumen füllen. Stellen Sie die untere Ebene des Fläschchens (mm) auf 0,5 ein und klicken Sie auf die Schaltfläche OK .
- Klicken Sie auf Methode ausführen.
- Klicken Sie auf die Schaltfläche Spurzuweisung , aktivieren Sie Zentrieren und stellen Sie die Parameter ein (Tabelle 2).
- Klicken Sie auf die Schaltfläche Weiter , um die automatische Probenahme zu starten.
- Schalten Sie die automatische Probenahmemaschine und das Luftventil aus. Entfernen Sie die Silikonfolie aus dem Probenahmeautomaten.
- Legen Sie die Silikonfolie in Schritt 6.1 auf die andere Seite des Doppeltank-Chromatographiezylinders, decken Sie den oberen Zylinderkopf ab und tränken Sie ihn 20 Minuten lang vor.
- Klemmen Sie das obere Ende der dünnen Schichtplatte vorsichtig mit einer Pinzette fest, legen Sie die Silikonfolie schnell in das Entwicklungsmittel und decken Sie den oberen Zylinderkopf ab.
HINWEIS: Nehmen Sie die Silikonfolie heraus, wenn die sich entfaltende Vorderkante 0,5-1,0 cm vom oberen Ende der dünnen Schichtplatte entfernt ist. - Nachdem das organische Lösungsmittel verdunstet ist, sprühen Sie die chromogene Lösung bei Raumtemperatur auf die Oberfläche der Silikonfolie, um chromogene Ergebnisse zu erzielen.
HINWEIS: Die chromogene Lösung ist eine wässrige Lösung, die 2 % FeCl3 und 1 % K3[Fe(CN)6] enthält.
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Representative Results
Dieses Versuchsprotokoll beschreibt die Identifizierung und das Sammeln von Rhodiola-Crenulat im Feld. Rhodiola crenulate lebt in der Regel in den alpinen Schuttzonen, Rinnenhängen und Felsspalten in großen Höhen. Der Lebensraum, die ganze Pflanze, die Blüte und die Blätter von Rhodiola crenulate sind in Abbildung 2 dargestellt. Rhodiola crenulate hat ein rötlich-braunes Rhizom (Abbildung 3A). Ein repräsentatives Bild des medizinischen Pulvers ist in Abbildung 3B dargestellt. Gemäß dem obigen Versuchsprotokoll können die mikroskopischen Ergebnisse wie folgt aufgelistet werden: 1) bräunlich-gelbe oder farblose Korkzellen, großes Aussehen, polygonal oder lang polygonal, mit etwas dickeren Wänden (Abbildung 3C); 2) Stärkekörner, die sich als einzelne oder mehrere Körner präsentieren, und Nabelspitze, die fischgrät- oder rissförmig erscheint (Abbildung 3D); 3) hauptsächlich Spiralgefäße, die eng angeordnet sind (Abbildung 3E); 4) achromatöses und ovales Xylemparenchym, das in Blättern vorliegt und Calciumoxalatsandkristalle enthält (Abbildung 3F); 5) unregelmäßig geformter, braunroter Pigmentblock (Abbildung 3G). Die Ergebnisse der Dünnschichttrennung zeigten, dass die Rhodiola crenulata-Probe (A4) als Flecken der gleichen Farbe an der Position erschien, die dem Chromatogramm der Gallussäure (A1), des Salidrosids (A2) und der Tyrosol-Standardlösung (A3) entsprach (Abbildung 3H). Gallussäure, Salidrosid und Tyrosol sind die wichtigsten und repräsentativen Bestandteile von Rhodiola-Crenulat. Diese Ergebnisse zeigen, dass eine vorläufige Identifizierung von Rhodiola crenulata mit den im Protokoll besprochenen Tests möglich ist.
Abbildung 1: Verbreitungskarte von Rhodiola crenulata. (A) Rhodiola crenulata ist hauptsächlich in China, Indien, Nepal und Bhutan verbreitet14. (B) Rhodiola crenulata ist hauptsächlich in Tibet, Qinghai, Sichuan, Yunnan und Guizhou in China verbreitet (produziert von soft ArcGis 10.6). Die statistischen Daten stammen von den Webseiten des Instituts für Botanik 15,16. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Abbildung 2: Bild der Pflanze Rhodiola crenulata . (A) Biotop von Rhodiola crenulat. (B) Nahaufnahme von Rhodiola crenulate. (C) Ganze Pflanze von Rhodiola crenulat. (D) Blüte von Rhodiola crenulata. (E) Blätter von Rhodiola crenulat. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Abbildung 3: Mikroskopische Eigenschaften und Dünnschichtchromatogramm von Rhodiola crenulata. (A) Arzneiwurzel von Rhodiola crenulata. (B) Arzneistoffkraft von Rhodiola crenulata. (C) Korkzelle. (D) Stärkekorn. (E) Spiralförmiges Gefäß. (F) Xylemparenchym (Calciumoxalatkristall). (G) Pigment. (H) Die dünnschichtchromatographische Trennung von Salidrosid (A1), Gallussäure (A2), Tyrosol (A3) und Rhodiola crenulata (A4). Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
| Parameter | Option |
| Applikationsposition Y (mm) | 10 |
| Erste Spurposition (mm) | 10 |
| Spurweite (mm) | 10 |
| Anwendungslänge (mm) | 5 |
| Auftragsbreite (mm) | 0.5 |
Tabelle 1: Parametereinstellungen der automatischen Abtastposition.
| Fläschchen-ID | Beschreibung | Volumen (μL) | Position | Art |
| 1 | Salidrosid | 3 | A1 | Referenz |
| 11 | Gallussäure | 1 | A2 | Referenz |
| 12 | Tyrosol | 2 | A3 | Referenz |
| 13 | Rhodiola-Crenulat-Probe | 2 | A4 | Probe |
Tabelle 2: Parametereinstellungen der automatischen Abtastreihenfolge.
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Discussion
Es gibt mehr als 90 Arten von Rhodiola-Pflanzen auf der Welt, und mehr als 60 % aller Arten kommen in China vor, darunter Rhodiola crenulata, Rhodiola rosea, Rhodiolas achalinensis und Rhodiola algida17. Rhodiola crenulata, die im ersten Teil des Chinesischen Arzneibuchs (2020) verzeichnet ist, ist eine traditionelle tibetische Medizin, die in großen Höhen angebaut wird. Die Marktnachfrage nach Rhodiola crenulata steigt jährlich, daher ist die Gewährleistung der korrekten Verwendung der Quelle der Schlüssel zur Gewährleistung einer sicheren Verwendung. Insbesondere die Standardisierung von der Feldkommissionierung bis hin zur einfachen und schnellen Identifizierung von Laborroutinen kann nicht ignoriert werden. Es wurde berichtet, dass Hochleistungsflüssigkeitschromatographie, Massenspektrometrie und einfache Sequenzwiederholungen Rhodiola-Crenulat genau von anderen Rhodiola-Arten unterscheiden können, was zeitaufwändig, komplex und teuer ist 18,19,20. Inzwischen haben wir eine mehrdimensionale Bewertungsmethode der sensorischen Erkennung (E-Nasen- und Farbanalyse) und eine HPLC-Methode zur Unterscheidung von Rhodiola crenulate21,22 etabliert.
Jedes medizinische Material hat seine einzigartige Wachstumsumgebung, mikroskopische Strukturmerkmale und Indexkomponenten. Dieses Protokoll bietet eine umfassende Methode zur Identifizierung von Rhodiola crenulata, von der Feldidentifikation über die Labormikroskopie bis hin zur Validierung mittels Dünnschichtchromatographie. Rhodiola crenulata wächst hauptsächlich in Höhen von mehr als 3000 m, bei niedrigen Temperaturen, niedrigem Sauerstoffgehalt und hoher ultravioletter Strahlung23. Rhodiola crenulata ist ein sukkulentes Kraut, was sein intuitives visuelles Merkmal ist. Sein Pulver erscheint rotbraun mit einem duftenden Geruch. Anhand ihrer Gewohnheiten, Pflanzenmorphologie, Blüten und Blätter unterscheidet sich Rhodiola crenulata von anderen Rhodiola-Arten im Freiland. Die mikroskopischen Ergebnisse von medizinischen Materialien zeigten das Vorhandensein von Stärkekörnern, Holzparenchymzellen (einschließlich Calciumoxalatsandkristallen), Korkzellen, Leitungen (hauptsächlich Gewindeleitungen) und großen Mengen an rotem Pigment. TLC ist eine chromatographische Trenntechnik zur Trennung von Mehrkomponentenproben, die üblicherweise bei der Identifizierung chinesischer medizinischer Materialien verwendet wird. Gallussäure, Tyrosol und Salidrosid werden häufig als Indexkomponenten von Rhodiola crenulate24 identifiziert. Die Ergebnisse der Dünnschichtchromatographie zeigten, dass die Lösung von Rhodiola crenulata an der entsprechenden Position die gleichen Farbflecken wie die Kontrolle (Gallussäure, Tyrosol und Salidrosid) aufwies. Es zeigt, dass Rhodiola crenulata Gallussäure, Tyrosol und Salidrosid enthält. In Kombination mit dem Wissen über die Anbauumgebung und mikroskopischen Ergebnissen kann Rhodiola crenulata vorläufig identifiziert werden.
Es ist erwähnenswert, dass es aufgrund der einzigartigen Anbaubedingungen fast unmöglich ist, wilde Rhodiola crenulata unterhalb der Höhe von 3000 m zu halten. Darüber hinaus wird nicht empfohlen, die Wurzeln und das Rhizom von Rhodiola crenulata während der Blütezeit zu ernten. Für die labormikroskopische Identifizierung sind das Trocknen der Wurzeln und das Sieben des Pulvers Voraussetzungen für die erfolgreiche Präparation mikroskopischer Proben. Sicherzustellen, dass sich keine Luftblase zwischen Objektträger, medizinischem Pulver und Deckglas befindet, ist auch wichtig, um die charakteristische Zusammensetzung unter dem Mikroskop zu beobachten. Bei der Dünnschichtchromatographie sind die Vorsättigung der Kieselgelplatte, das angemessene Entwicklungsmittel und die Probenkonzentration wichtige Faktoren für die erfolgreiche Trennung verschiedener Komponenten in der Testprobe. Im Vergleich zur herkömmlichen manuellen Probenahme erhöht der automatische Probenahmeprozess dieses Protokolls zweifellos die Genauigkeit der Ergebnisse und die Wiederholbarkeit des Experiments. Die Subjektivität der Aroma- und Geschmacksidentifikation ist zu stark und kann zu Fehleinschätzungen führen. Im Vergleich zur Hochleistungsflüssigkeitschromatographie, der H-Kernspinresonanz und der Massenspektrometrie kann die Dünnschichtchromatographie den Gehalt an Verbindungen in medizinischen Materialien nicht quantitativ analysieren25. Obwohl DNA-Barcoding eine überlegene Genauigkeit bei der Identifizierung von Kräutern aufweist, ist es aufgrund seines hohen Preises bei der Identifizierung von medizinischen Materialien nicht universelleinsetzbar 26. Darüber hinaus ist die Feld-Labor-Identifizierung und Mikroskopie in Kombination mit der in diesem Protokoll vorgesehenen Dünnschichtchromatographie-Technik auf fast alle medizinischen Materialien anwendbar. Dies ist ein billiges, einfaches und schnelles Verfahren zur Identifizierung von medizinischen pflanzlichen Materialien.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (81973569, 82274207 und 82104533), dem Xinglin Scholar Research Promotion Project der Chengdu University of TCM (XKTD2022013) und dem Key Research and Development Program von Ningxia (2023BEG02012) unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.22 μm millipore filter | Millipore | SLGP033RB | |
| Automatic sampling machine | CAMAG | ATS 4 | |
| Chloral hydrate | Fuzhou Brunei Technology Co., Ltd | ST1002 | |
| Chromatographic sample bottles | Zhejiang ALWSCI Technology Co., Ltd | C0000008 | |
| Conical flask | Sichuan Shubo Co., Ltd | 1121 | |
| Cover glass | Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd | 10211818c | |
| Dissecting needle | Shanghai Bingyu Fluid Technology Co., Ltd | BY-5026 | |
| Electronic balance | SHIMADZU | ATX124 | |
| Ethyl acetate | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 2022120901 | |
| Formic acid | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 2021110801 | |
| Gallic acid | Chengdu Herbpurify Co., Ltd | M-017 | |
| Glycerol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10010618 | |
| High speed crusher | Beijing Zhongxingweiye Instrument Co., Ltd | FW-100 | |
| Methanol | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 20230108 | |
| Microscope | Chongqing Oprec Nistrument Co., Ltd | B203 | |
| Microscope slide | Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd | 7105P-G | |
| Oven | Shanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd | DHG-8145 | |
| Pharmacopoeia sieve | Hangzhou Xingrun sieve factory | 572423281330 | |
| Pipette | Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd | 120302008 | |
| Salidroside | Chengdu Herbpurify Co., Ltd | H-040 | |
| Saturate tank | Yancheng Liegu Technology Co., Ltd | 10*20 P-1 | |
| Silica gel plate | Yantai Jiangyou Silica Gel Development Co., Ltd | HSG20211227 | |
| Trichloromethane | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 20221013-1 | |
| Tweezer | Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd | 130302027 | |
| Tyrosol | Chengdu Herbpurify Co., Ltd | L-042 | |
| Ultrasound equipment | Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd | SB-8200DTS | |
| Volumetric pipet | Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd | 120301006 |
References
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