Summary
Burada, Rhodiola Crenulata'nın habitat, bitki morfolojisi, tıbbi özellikler, mikroskobik özellikler ve ince tabaka kromatografisinden tanımlanmasını açıklıyoruz.
Abstract
Tıbbi materyallerin tanımlanması, ilaç güvenliğinin öncülü ve garantisidir. Bilimsel araştırmacıların çoğu, bitkilerin basit, hızlı, etkili ve ucuz tanımlama sürecini tercih etmek zorundadır. Rhodiola crenulata , çoğunlukla Çin'in Tibet, Yunnan ve Sichuan bölgelerinde dağıtılan, yüksek rakımlarda yetişen geleneksel bir Tibet tıbbıdır. Rhodiola crenulate , anti-inflamatuar, anti-hipoksi ve antioksidan özellikler gibi çoklu biyoaktivitelere sahiptir ve gelişme için büyük bir potansiyele sahiptir. Artan pazar talebi ve kaynak içeriğindeki hızlı düşüşle birlikte, Rhodiola crenulata'nın çok sayıda kafası karışmış ürünü insanları rahatsız ediyor. Bu nedenle, bu protokol, rutin laboratuvar testleri ile birlikte sahada Rhodiola crenulata tanımlanması için standart bir süreç sunar. Habitat, mikroskobik özellikler ve ince tabaka kromatografisinin kombinasyonu, şüphesiz Rhodiola crenulata'yı hızlı, verimli ve ekonomik bir şekilde tanımlayacak ve Tibet tıbbının sürekli gelişimine ve tıbbi malzemelerin kalite kontrolüne katkıda bulunacaktır.
Introduction
Bitkisel tıbbın Çin'de uzun bir geçmişi ve zengin uygulama deneyimi vardır ve Shennong'un bitkisel klasiği1'deki ilk sistematik kayıttır. Sıtmaya uygulanan artemisinin keşfi, bitkisel ilaçların gelişimini yeni bir aşama1'e teşvik etti. Bitkisel tıbbın kesin mekanizmasını ortaya çıkarmak için modern bilimsel teknolojinin kullanılması, bitkisel ilaçlara olan kullanım oranını ve talebi artırarak bunun için yeni bir uluslararası pazar açmaktadır 2,3,4. Ancak, bu bir dizi olumsuz etkiye yol açmıştır. Profesyonel olmayanlar, bitkisel ilaçların özelliklerini belirsiz bir şekilde anlamaktadır, bu da bitkisel ilaç kullanımını büyük bir güvenlik riskiyle karşı karşıya bırakmaktadır5.
Rhodiola türünün bitkilerinden biri olan Rhodiola crenulata, esas olarak Tibet, kuzeybatı Yunnan ve Çin'in batı Sichuan'ında yayılış gösterir (Şekil 1)6,7. Rhodiola crenulata "qi'yi canlandırma ve kan dolaşımını teşvik etme, nabzı temizleme ve astımı yatıştırma" işlevi ile hipoksik ilişkili hastalıkların tedavisi için salidrosid, tirosol, gallik asit ve diğer bileşikleri içerir8,9,10,11. Saha araştırması, Rhodiola crenulata'nın 4.000-5.600 m yükseklikte alpin talus bölgelerinde, oluk yamaçlarında ve kaya yarıklarında bulunabileceğini göstermektedir. Yetiştirme ortamı soğuk, güneş ışığı ve yoğun radyasyonla doludur ve alpin çayır ekosistemine aittir. Rhodiola crenulata büyüme alanına göre lameller ve nokta benzeri popülasyonlarda dağılabilir ve gen akışı çapraz tozlaşma yoluyla gerçekleştirilebilir.
Rhodiola cinsinin polen kürtajı, yasadışılık kazısı ve yozlaşmış ekolojik çevre, Rhodiola crenulata'yı nesli tükenmekte olan bir türhaline getirmektedir 6,12. Rhodiola crenulata'nın yüksek tıbbi değeri göz önüne alındığında, sahte ürünlerin piyasaya akması bekleniyor. Bu makale, Rhodiola crenulata habitatını ve bazı uygun laboratuvar tanımlama yöntemlerini sunmaktadır. İlk olarak, Rhodiola crenulata'nın büyüme ortamını ve tıbbi özelliklerini gözlemledik. İkinci olarak, tıbbi tozun mikro yapısı mikroskopla gözlendi. Son adım kilit noktadır. Rhodiola crenulata'nın temsili bileşenleri, bu bileşenlerin belirli bir maddedeki farklı adsorpsiyon veya çözünme özelliklerine göre ayrıldı ve tanımlandı. Tıbbi bitkilerin DNA tabanlı kimlik doğrulama veya metabolomik analiz yöntemleri karmaşık ve pahalıdır13. Bu temel, kullanışlı ve ekonomik yöntemler, Rhodiola crenulata'yı hızlı bir şekilde tanımlayabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Rhodiola crenulata Çin'in Sichuan Eyaleti, Ganzi Tibet Özerk İli, Zhuoda Kar Dağı, Ganzi İlçesi'nden (N 31.44570°, D 99.96086°, 4892 m) toplandı. Bitkiler, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Etnik Tıp Okulu'nda Profesör Yi Zhang tarafından gerçek olarak doğrulandı.
1. Rhodiola crenulata koleksiyonu
- Rhodiola crenulata'nın habitat haritasını fotoğraflayın.
- Rhodiola crenulata'nın tüm bitkisini, yapraklarını, kaliksini ve köksapını fotoğraflayın.
- Daha sonra sorunsuz madenciliği sağlamak için Rhodiola crenulata'nın 1 m içindeki yabani otları ve kırık taşları temizlemek için bir kürek kullanın.
- Tüm rizosfer görünene kadar toprağı bir çapa ile kazın ve kazık kökü toplayın.
NOT: Tıbbi kısımlarda kullanılan Rhodiola crenulata'nın kökleri ve rizomları, çiçek saplarının solduğu sonbaharda toplanmalıdır.
2. Karakteristik tanımlama
- Rhodiola crenulata'nın görünüm özelliklerini çıplak gözle gözlemleyin: silindirik ve kısa kazık kökler ve rizomlar, kahverengi yüzey, pembe desenli zarlı sarı epidermis ve turuncu-kırmızı veya bordo dilimler.
- Koku ile tanıyın: Burun kenarındayken hoş kokulu bir koku verir.
- Damak tadınıza göre tanımlayın: Ağzınıza küçük bir parça kök alın, önce yudumlayın ve sonra çiğneyin, tadı biraz acı, sonra tatlı.
3. Tıbbi tozdaki nişasta granüllerinin mikroskobik tanımlanması
- Rhodiola crenulata'nın yüzeyindeki toprağı bir fırça ile alın, 40 °C'de fırına koyun ve her 24 saatte bir otları çevirin.
NOT: Tıbbi malzemelerin kırılma kolaylığı, nemin kurutulması için standart olarak kabul edilir. - Kurutulmuş tıbbi malzemeleri bir toz makinesi kullanarak toz haline getirin ve ilaçlı No. 3 elek kullanarak tıbbi tozu süzün (bkz.
- Temiz bir slayt alın (Malzeme Tablosuna bakın), tozu bir diseksiyon iğnesi ile kazın (Malzeme Tablosuna bakın) ve 2 mm içinde slaytın üçte birine eşit şekilde yerleştirin.
- Toza bir damla deiyonize su eklemek için bir cam damlalık kullanın (Malzeme Tablosuna bakın). Sıvı seviyesine hızlı bir şekilde dokunmak ve tozu örtmek için kapak camının bir ucunu tutmak için bir cımbız kullanın (Malzeme Tablosuna bakın).
NOT: Numunenin homojen bir şekilde karışmasını sağlamak için su ve tıbbi tozu nazikçe karıştırmak için anatomik bir iğne kullanın. Sürgü, toz ve kapak camı arasında hava kabarcığı olmamalıdır. - Mikroskobu açın ( Malzeme Tablosuna bakın) ve sabitlemek için 3.4 adımındaki slaytı platforma yerleştirin. Tozu görmek için ışık kaynağını ve kaba odak spiralini ayarlayın. Dokular net bir şekilde görülene kadar ince parafokal spirali ayarlayın. 40x'lik bir hedefe geçin ve nişasta granüllerini gözlemleyin.
NOT: Tekli veya çoklu taneler halinde sunulan taneleri nişastalayın ve göbek noktası balıksırtı veya çatlak şeklinde görünür.
4. Tıbbi tozdaki kateterlerin, mantar hücrelerinin, liflerin, odun parankim hücrelerinin ve pigment kütlelerinin mikroskobik tanımlanması
- Temiz bir slayt alın ( Malzeme Tablosuna bakın), tozu bir diseksiyon iğnesi ile kazın (Malzeme Tablosuna bakın) ve slaytın üçte birine yerleştirin.
- Toza bir damla kloral hidrat (Malzeme Tablosuna bakınız) eklemek için bir cam damlalık (Malzeme Tablosuna bakınız) kullanın. Slaytı bir cımbızla alın ( Malzeme Tablosuna bakın) ve alkol lambasında her seferinde 1 saniye boyunca üç kez ısıtın.
NOT: Isıtma sırasında kabarcıklardan kaçınılmalıdır. Sıvı akmaz kalır, bu da penetrasyonun tamamlandığını gösterir. - Bir damla gliserin eklemek için bir cam damlalık kullanın (Malzeme Tablosuna bakın). Sıvı seviyesine hızlı bir şekilde dokunmak için kapak camının bir ucunu tutmak için bir cımbız kullanın.
- Mikroskobu açın ve sabitlemek için slaydı platforma yerleştirin. Tozu görmek için ışık kaynağını ve kaba odak spiralini ayarlayın. Dokular net bir şekilde görülene kadar ince parafokal spirali ayarlayın. 40x objektif merceğe geçerek kateter, mantar hücreleri, lifler, ahşap parankim hücreleri ve pigment bloğunu gözlemleyin.
NOT: Mantar hücrelerinin poligonal veya uzun poligonali, bariz sarmal yapıya sahip spiral damar, kalsiyum oksalat kum kristalleri içeren ksilem parankimi ve kırmızı veya kahverengimsi-kırmızı pigment bloğu.
5. Rhodiola crenulata ince tabaka kromatografik (TLC) numunelerinin hazırlanması ve referansı
- Tartım kağıdını teraziye yerleştirin ( Malzeme Tablosuna bakın) ve 3 g Rhodiola crenulata tozunu tartın.
- Tozu 100 mL'lik konik bir şişeye alın ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve büyük bir göbek pipeti ile 25 mL metanol ekleyin (Malzeme Tablosuna bakınız). Konik şişeyi ultrasonik alete koyun. Gücü 250 W'a, frekansı 40 kHz'e ve süreyi 30 dakikaya ayarlayın ( Malzeme Tablosuna bakın) ve cihazı açın.
NOT: Ultrason cihazının amacı, Rhodiola crenulata tozunun sonraki ince tabaka kromatografik deneylerin sonuçlarını etkilemeden tamamen çözülmesini sağlamaktır. - Konik şişeyi çıkarın ve dış şişeyi oda sıcaklığına (RT) kadar akan su ile durulayın.
- Adım 5.3'te hazırlanan 800 μL sıvıyı 1 mL'lik bir şırınga ile aspire edin. 0.22 μm mikro gözenekli filtre membranı ile filtreleyin ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve kromatografik bir numune şişesinde 400 μL orta akış Rhodiola crenulata numune çözeltisi toplayın.
- Tartın ve sırasıyla 3 ayrı 100 mL konik şişeye 2 mg salidrosit, tirosol ve gallik asit ekleyin ( Malzeme Tablosuna bakınız). Her konik şişeye büyük bir göbek pipeti ile 25 mL metanol ekleyin.
- Konik şişeyi ultrasonik alete koyun, gücü 250 W'a, frekansı 40 kHz'e ve zamanı 30 dakikaya ayarlayın ve adım 5.3'ü tekrarlayın (Malzeme Tablosuna bakınız).
- Adım 5.6'da hazırlanan 800 μL sıvıyı 1 mL'lik bir şırınga ile aspire edin. 0.22 μm mikro gözenekli filtre membranı ile filtreleyin (Malzeme Tablosuna bakın) ve ilgili kromatografik numune şişelerinde 400 μL orta akış salidrosid, tirosol ve gallik asit standart çözeltisi toplayın.
6. TLC tanımlaması
- Pipet triklorometan (5 mL), etil asetat (4 mL), metanol (2 mL) ve formik asit (0,5 mL) (bkz. Çift tanklı kromatografi silindirinin bir tarafına ekleyin ( Malzeme Tablosuna bakın), çalkalayın ve eşit şekilde karıştırın. Üst silindir kapağını kapatın.
- Gallik asit, salidrosit, tirosol standart çözeltisi ve Rhodiola crenulata çözeltisini numune rafına A1-A4 konumlarına yerleştirin.
- 5 cm x 10 cm silikon levhayı (Malzeme Tablosuna bakın) örnekleme tablosuna yerleştirin. Otomatik numune alma makinesini çalıştırın ( Malzeme Tablosuna bakın) ve hava kontrol valfini açın.
- visionCATS yazılımını açın (bkz. Tamam'> Yeni > Yeni Klasör (Rhodiola crenulata sample test adlı) seçeneğine tıklayın. ATS 4> Tamam'> Yeni Yöntem'e (Rhodiola crenulata örnek testi adı) tıklayın.
- Adım Tanımını Bitir'i tıklatın. Açıklamayı düzenlemek için Atamayı İzle'ye tıklayın (gallik asit, salidrosit, tirosol ve Rhodiola crenulata örneği).
- HPTLC Adımları'na tıklayın. İnce katman parametrelerini ayarlayın (5 cm x 10 cm). Uygulama Türü'nü (bant) seçin, parametreleri ayarlayın (Tablo 1) ve Tamam düğmesine tıklayın.
- Açık Dolum/Durulama Kalitesi. Yalnızca Programlanmış Birimi Doldur'u işaretleyin. Flakon alt seviyesini (mm) 0,5'e ayarlayın ve OK düğmesine basın.
- Execute Method'a (Yöntemi Yürüt) tıklayın.
- Atamayı İzle düğmesini tıklayın, Ortala'yı işaretleyin ve parametreleri ayarlayın (Tablo 2).
- Otomatik örnekleme için Devam düğmesine tıklayın.
- Otomatik numune alma makinesini ve hava valfini kapatın. Silikon tabakayı otomatik numune alma makinesinden çıkarın.
- Silikon tabakayı adım 6.1'de çift tanklı kromatografi silindirinin diğer tarafına koyun, üst silindir kapağını kapatın ve 20 dakika önceden doyurun.
- İnce tabaka plakasının üst ucunu bir cımbızla hafifçe sıkıştırın, silikon tabakayı hızlı bir şekilde geliştirme maddesine yerleştirin ve üst silindir kapağını kapatın.
NOT: Açılan ön kenar, ince tabaka plakasının üst ucundan 0.5-1.0 cm uzakta olduğunda silikon tabakayı çıkarın. - Organik çözücü buharlaştıktan sonra, kromojenik sonuçlar elde etmek için kromojenik çözeltiyi oda sıcaklığında silikon tabakanın yüzeyine püskürtün.
NOT: Kromojenik çözelti, %2FeCl3 ve %1K3[Fe(CN)6] içeren sulu bir çözeltidir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu deneysel protokol, sahada Rhodiola crenulate'ın tanımlanmasını ve toplanmasını açıklar. Rhodiola crenulate , yüksek rakımlarda alpin talus bölgelerinde, oluk yamaçlarında ve kaya yarıklarında yaşama eğilimindedir. Rhodiola crenulate'in habitatı, bütün bitkisi, çiçeği ve yaprakları Şekil 2'de gösterilebilir. Rhodiola crenulate kırmızımsı kahverengi bir köksapa sahiptir (Şekil 3A). Tıbbi tozun temsili bir görüntüsü Şekil 3B'de gösterilmektedir. Yukarıdaki deney protokolüne göre, mikroskobik sonuçlar şu şekilde sıralanabilir: 1) kahverengimsi sarı veya renksiz mantar hücreleri, büyük görünümlü, çokgen veya uzun çokgen, biraz daha kalın duvarlı (Şekil 3C); 2) tek veya çoklu taneler olarak ortaya çıkan nişasta taneleri ve balıksırtı veya çatlak şeklinde görünen göbek ucu (Şekil 3D); 3) esas olarak yakından düzenlenmiş spiral kaplar (Şekil 3E); 4) tabakalar halinde sunulan ve kalsiyum oksalat kum kristalleri içeren akromatöz ve oval ksilem parankimi (Şekil 3F); 5) düzensiz şekilli, kahverengi-kırmızı pigment bloğu (Şekil 3G). İnce tabaka ayırma sonuçları, Rhodiola crenulata numunesinin (A4), gallik asit (A1), salidrosit (A2), tirozol standart çözeltisinin (A3) kromatogramına karşılık gelen konumda aynı renkte lekeler olarak göründüğünü gösterdi (Şekil 3H). Gallik asit, salidrosid ve tirosol, Rhodiola crenulate'ın ana ve temsili bileşenleridir. Bu sonuçlar, protokolde tartışılan testlerle Rhodiola crenulata ön tanımlamasının mümkün olduğunu göstermektedir.
Şekil 1: Rhodiola crenulata'nın dağılım haritası. (A) Rhodiola crenulata esas olarak Çin, Hindistan, Nepal ve Butan'da dağıtılmaktadır14. (B) Rhodiola crenulata esas olarak Tibet, Qinghai, Sichuan, Yunnan ve Çin'in Guizhou'sunda dağıtılır (yumuşak ArcGis 10.6 tarafından üretilir). İstatistiksel veriler Botanik Enstitüsü'nün web sitelerinden gelmektedir15,16. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Rhodiola crenulata bitkisinin resmi. (A) Rhodiola crenulate'in biyotopu. (B) Rhodiola crenulate'in yakın çekimi. (C) Bütün Rhodiola crenulate bitkisi. (D) Rhodiola crenulata'nın çiçeği. (E) Rhodiola'nın yaprakları crenulate. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: Rhodiola crenulata'nın mikroskobik özellikleri ve ince tabaka kromatogramı. (A) Rhodiola crenulata'nın tıbbi kökü. (B) Rhodiola crenulata'nın tıbbi maddi gücü. (C) Mantar hücresi. (D) Nişasta tanesi. (E) Spiral kap. (F) Ksilem parankimi (kalsiyum oksalat kristali). (G) Pigment. (H) Salidrosit (A1), gallik asit (A2), tirozol (A3) ve Rhodiola crenulata'nın (A4) ince tabaka kromatografisi ayrımı. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Parametre | Seçenek |
| Uygulama konumu Y (mm) | 10 |
| İlk iz konumu (mm) | 10 |
| İz mesafesi (mm) | 10 |
| Uygulama uzunluğu (mm) | 5 |
| Uygulama genişliği (mm) | 0.5 |
Tablo 1: Otomatik örnekleme konumunun parametre ayarları.
| Flakon Kimliği | Tarif | Hacim (μL) | Konum | Tür |
| 1 | salidrosit | 3 | A1 Serisi | Referans |
| 11 | gallik asit | 1 | A2 | Referans |
| 12 | tirosol | 2 | A3 Serisi | Referans |
| 13 | Rhodiola crenulate örneği | 2 | A4 Sayfası | Örnek |
Tablo 2: Otomatik örnekleme sırasının parametre ayarları.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Dünyada 90'dan fazla Rhodiola bitkisi türü vardır ve tüm türlerin %60'ından fazlası Çin'de bulunur, Rhodiola crenulata, Rhodiola rosea, Rhodiolas achalinensis ve Rhodiola algida17 dahil olmak üzere yaygın olanlar. Çin Farmakopesi'nin (2020) ilk bölümünde kaydedilen Rhodiola crenulata, yüksek irtifalarda yetişen geleneksel bir Tibet tıbbıdır. Rhodiola crenulata için pazar talebi her yıl artmaktadır, bu nedenle kaynağın doğru kullanımını sağlamak, güvenli kullanımı sağlamanın anahtarıdır. Özellikle, saha seçiminden basit ve hızlı laboratuvar rutin tanımlamasına kadar standardizasyon göz ardı edilemez. Yüksek performanslı sıvı kromatografisi, kütle spektrometrisi ve basit dizi tekrarlarının, zaman alıcı, karmaşık ve pahalı olan Rhodiola crenulate'ı diğer Rhodiola türlerinden doğru bir şekilde tanımlayabildiği bildirilmiştir 18,19,20. Bu arada, Rhodiola crenulate21,22'yi ayırt etmek için çok boyutlu bir duyusal tanıma değerlendirme yöntemi (E-burun ve renk analizi) ve HPLC yöntemi oluşturduk.
Her tıbbi materyalin kendine özgü yetiştirme ortamı, mikroskobik yapı özellikleri ve indeks bileşenleri vardır. Bu protokol, saha tanımlamasından laboratuvar mikroskobuna ve ince tabaka kromatografisi kullanılarak doğrulamaya kadar Rhodiola crenulata'nın tanımlanması için kapsamlı bir yöntem sağlar. Rhodiola crenulata esas olarak 3000 m'den daha yüksek rakımlarda, düşük sıcaklıkta, düşük oksijende ve yüksek ultraviyole radyasyon alanlarında yetişir23. Rhodiola crenulata , sezgisel görsel özelliği olan etli bir bitkidir. Tozu kokulu bir koku ile kırmızımsı kahverengi görünür. Alışkanlıklarına, bitki morfolojisine, çiçeklerine ve yapraklarına göre Rhodiola crenulata , tarladaki diğer Rhodiola türlerinden ayrılır. Tıbbi malzemelerin mikroskobik sonuçları, nişasta granüllerinin, odun parankim hücrelerinin (kalsiyum oksalat kumu kristalleri dahil), mantar hücrelerinin, kanalın (esas olarak dişli kanal) ve büyük miktarlarda kırmızı pigmentin varlığını gösterdi. TLC, Çin tıbbi malzemelerinin tanımlanmasında yaygın olarak kullanılan, çok bileşenli numunelerin ayrılması için kromatografik bir ayırma tekniğidir. Gallik asit, tirosol ve salidrosit genellikle Rhodiola crenulate24'ün indeks bileşenleri olarak tanımlanır. İnce tabaka kromatografisinin sonuçları, Rhodiola crenulata çözeltisinin, kontrol ile karşılık gelen konumda (gallik asit, tirosol ve salidrosit) aynı renk lekelerini gösterdiğini gösterdi. Rhodiola crenulata'nın gallik asit, tirosol ve salidrosit içerdiğini gösterir. Yetiştirme ortamı bilgisi ve mikroskobik sonuçlarla birleştiğinde, Rhodiola crenulata önceden tanımlanabilir.
Eşsiz yetiştirme ortamının, 3000 m rakımın altında yabani Rhodiola crenulata'ya sahip olmanın neredeyse imkansız olduğunu belirlediğini belirtmekte fayda var. Ayrıca çiçeklenme döneminde Rhodiola crenulata köklerinin ve köksapının hasat edilmesi tavsiye edilmez. Laboratuvar mikroskobik tanımlaması için, köklerin kurutulması ve tozun elenmesi, mikroskobik numunelerin başarılı bir şekilde hazırlanması için ön koşullardır. Slayt, tıbbi toz ve kapak camı arasında hava kabarcığı olmamasını sağlamak da karakteristik bileşimi mikroskop altında gözlemlemenin anahtarıdır. İnce tabaka kromatografisi için, silika jel plakasının ön doygunluğu, makul geliştirme maddesi ve numune konsantrasyonu, test numunesindeki farklı bileşenlerin başarılı bir şekilde ayrılması için önemli faktörlerdir. Geleneksel manuel örnekleme ile karşılaştırıldığında, bu protokolün otomatik örnekleme işlemi şüphesiz sonuçların doğruluğunu ve deneyin tekrarlanabilirliğini artırır. Aroma ve tat tanımlamasının öznelliği çok güçlüdür ve yanlış yargılara yol açabilir. Yüksek performanslı sıvı kromatografisi, H-nükleer manyetik rezonans ve kütle spektrometrisi ile karşılaştırıldığında, ince tabaka kromatografisi, tıbbi malzemelerdeki bileşiklerin içeriğini nicel olarak analiz edemez25. DNA barkodlaması bitkisel tanımlamada üstün doğruluğa sahip olmasına rağmen, yüksek fiyatı tıbbi materyallerin tanımlanmasında evrensel olmadığını belirlemektedir26. Ayrıca, bu protokolde sağlanan ince tabaka kromatografi tekniği ile birleştirilmiş sahadan laboratuvara tanımlama ve mikroskopi, hemen hemen tüm tıbbi malzemelere uygulanabilir. Bu, herhangi bir tıbbi bitkisel materyalin tanımlanması için ucuz, basit ve hızlı bir işlemdir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Acknowledgments
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81973569, 82274207 ve 82104533), TCM Chengdu Üniversitesi'nin Xinglin Akademik Araştırma Teşvik Projesi (XKTD2022013) ve Ningxia Temel Araştırma ve Geliştirme Programı (2023BEG02012) tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.22 μm millipore filter | Millipore | SLGP033RB | |
| Automatic sampling machine | CAMAG | ATS 4 | |
| Chloral hydrate | Fuzhou Brunei Technology Co., Ltd | ST1002 | |
| Chromatographic sample bottles | Zhejiang ALWSCI Technology Co., Ltd | C0000008 | |
| Conical flask | Sichuan Shubo Co., Ltd | 1121 | |
| Cover glass | Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd | 10211818c | |
| Dissecting needle | Shanghai Bingyu Fluid Technology Co., Ltd | BY-5026 | |
| Electronic balance | SHIMADZU | ATX124 | |
| Ethyl acetate | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 2022120901 | |
| Formic acid | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 2021110801 | |
| Gallic acid | Chengdu Herbpurify Co., Ltd | M-017 | |
| Glycerol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10010618 | |
| High speed crusher | Beijing Zhongxingweiye Instrument Co., Ltd | FW-100 | |
| Methanol | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 20230108 | |
| Microscope | Chongqing Oprec Nistrument Co., Ltd | B203 | |
| Microscope slide | Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd | 7105P-G | |
| Oven | Shanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd | DHG-8145 | |
| Pharmacopoeia sieve | Hangzhou Xingrun sieve factory | 572423281330 | |
| Pipette | Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd | 120302008 | |
| Salidroside | Chengdu Herbpurify Co., Ltd | H-040 | |
| Saturate tank | Yancheng Liegu Technology Co., Ltd | 10*20 P-1 | |
| Silica gel plate | Yantai Jiangyou Silica Gel Development Co., Ltd | HSG20211227 | |
| Trichloromethane | Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd | 20221013-1 | |
| Tweezer | Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd | 130302027 | |
| Tyrosol | Chengdu Herbpurify Co., Ltd | L-042 | |
| Ultrasound equipment | Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd | SB-8200DTS | |
| Volumetric pipet | Changde BKMAM Biotechnology Co., Ltd | 120301006 |
References
- Zhang, J., et al. Traditional herbal medicine and nanomedicine: Converging disciplines to improve therapeutic efficacy and human health. Advanced Drug Delivery Reviews. 178, 113964 (2021).
- Yin, R., et al. The positive role and mechanism of herbal medicine in Parkinson's Disease. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 9923331 (2021).
- Li, F. S., Weng, J. K. Demystifying traditional herbal medicine with modern approach. Nature Plants. 3, 17109 (2017).
- da Fonseca, L. R., et al. Herbal medicinal products from Passiflora for anxiety: An unexploited potential. The Scientific World Journal. 2020, 6598434 (2020).
- Aziato, L., Antwi, H. O. Facilitators and barriers of herbal medicine use in Accra, Ghana: an inductive exploratory study. BMC Complementary and Alternative Medicine. 16, 142 (2016).
- Tao, H., et al. Rhodiola species: A comprehensive review of traditional use, phytochemistry, pharmacology, toxicity, and clinical study. Medicinal Research Reviews. 39 (5), 1779-1850 (2019).
- Wang, Y., et al. The dietary supplement Rhodiola crenulata extract alleviates dextran sulfate sodium-induced colitis in mice through anti-inflammation, mediating gut barrier integrity and reshaping the gut microbiome. Food & Function. 12 (7), 3142-3158 (2021).
- Xie, N. Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-κB/NLRP3-mediated inflammation. Phytomedicine. 103, 154240 (2022).
- Wang, X., et al. Salidroside, a phenyl ethanol glycoside from Rhodiola crenulata, orchestrates hypoxic mitochondrial dynamics homeostasis by stimulating Sirt1/p53/Drp1 signaling. Journal of Ethnopharmacology. 293, 115278 (2022).
- Ma, D., et al. Chemical characteristics of Rhodiola Crenulata and its mechanism in acute mountain sickness using UHPLC-Q-TOF-MS/MS combined with network pharmacology analysis. Journal of Ethnopharmacology. 294, 115345 (2022).
- Wang, X., et al. Rhodiola crenulata attenuates apoptosis and mitochondrial energy metabolism disorder in rats with hypobaric hypoxia-induced brain injury by regulating the HIF-1α/microRNA 210/ISCU1/2(COX10) signaling pathway. Journal of Ethnopharmacology. 241, 111801 (2019).
- d'Avigdor, E., Wohlmuth, H., Asfaw, Z., Awas, T. The current status of knowledge of herbal medicine and medicinal plants in Fiche, Ethiopia. Journal of Ethnobiology and Ethnomedicine. 10, 38 (2014).
- Sánchez, M., González-Burgos, E., Divakar, P. K., Gómez-Serranillos, M. P. DNA-based authentication and metabolomics analysis of medicinal plants samples by DNA barcoding and ultra-high-performance liquid chromatography/triple quadrupole mass spectrometry (UHPLC-MS). Plants (Basel, Switzerland). 9 (11), 1601 (2020).
- Rhodiola renulata (Hook.fil & Thomson) H.Ohba. , Available from: https://www.gbif.org/species/4200529 (2023).
- Plant + data center. , Available from: https://www.iplant.cn/ (2023).
- Chinese virtual herbarium. , Available from: https://www.cvh.ac.cn/ (2023).
- Cunningham, A. B. There "ain't no mountain high enough"?: The drivers, diversity and sustainability of China's Rhodiola trade. Journal of Ethnopharmacology. 252, 112379 (2020).
- Wang, Q., Ruan, X., Jin, Z. H., Yan, Q. C., Tu, S. Identification of Rhodiola species by using RP-HPLC. Journal of Zhejiang University. Science. B. 6 (6), 477-482 (2005).
- Dong, X., Guo, Y., Xiong, C., Sun, L. Evaluation of two major Rhodiola species and the systemic changing characteristics of metabolites of Rhodiola crenulata in different altitudes by chemical methods combined with UPLC-QqQ-MS-based metabolomics. Molecules. 25 (18), 4062 (2020).
- Zhao, W., et al. HPLC fingerprint differentiation between natural and ex situ populations of Rhodiola sachalinensis from Changbai Mountain, China. PloS One. 9 (11), 112869 (2014).
- Yu, Y. Y. Quality evaluation of Tibetan medicine Rhodiolae crenulatae radix et rhizome based on sensory recognition and near infrared spectrum analysis. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. , Chinese Master's Thesis (2020).
- Lv, X. M. Simultaneous determination of 5 chemical components in 3 kinds of Rhodiola rosea by HPLC. China Pharmacy. 29 (18), 2515-2519 (2018).
- Dong, T., Sha, Y., Liu, H., Sun, L. Altitudinal variation of metabolites, mineral elements and antioxidant activities of Rhodiola crenulata (Hook.f. & Thomson) H.Ohba. Molecules. 26 (23), 7383 (2021).
- Ma, D., et al. Application of UHPLC fingerprints combined with chemical pattern recognition analysis in the differentiation of six Rhodiola species. Molecules. 26 (22), 6855 (2021).
- Li, X. H., et al. Metabolic discrimination of different Rhodiola species using 1H-NMR and GEP combinational chemometrics. Chemical & Pharmaceutical Bulletin. 67 (2), 81-87 (2019).
- Liu, Y., et al. Identification of Hippophae species (Shaji) through DNA barcodes. Chinese Medicine. 10, 28 (2015).
