تحلل Proteolytically Alginate Hydrogels والميكروبات الهيدروفوبية ل Porcine Oocyte تغليف
Summary
هنا هي بروتوكولين لتغليف البويضات porcine في ظروف ثقافة 3D. في الأول، يتم تغليف مجمعات الزُنَق (COCs) في الخرز الفيبرين-الجينات. وفي الثانية، يتم وضعها مع جزيئات مسحوق البروبيلين الإيثيلين المفلورة (ميكروبيراكات). يضمن كلا النظامين الظروف المثلى للحفاظ على تنظيمهما ثلاثي الأبعاد.
Abstract
وفي مجال البيولوجيا الإنجابية، أدت ثورة التكنولوجيا الأحيائية التي بدأت بالتلقيح الاصطناعي وتكنولوجيا نقل الأجنة إلى تطوير تقنيات المساعدة على الإنجاب مثل البويضة في نضوج المختبرات (IVM)، والتخصيب في المختبر (IVF) واستنساخ الحيوانات الأليفة عن طريق النقل النووي من الخلايا الجسدية. IVM هو الأسلوب خاصة من أهمية. بل هو منصة التكنولوجيا لتوريد ناضجة، جيدة الجودة البويضات لتطبيقات مثل الحد من الفاصل الزمني جيل في الأنواع الهامة تجاريا أو المهددة بالانقراض، والبحوث المتعلقة في المختبر التكاثر البشري، وإنتاج الحيوانات المعدلة وراثيا لعلاج الخلايا. مصطلح بويضة الجودة يشمل اختصاصها لاستكمال النضج، أن تكون المخصبة، مما يؤدي إلى نسل صحي. وهذا يعني أن البويضات ذات النوعية الجيدة هي ذات أهمية قصوى للتخصيب الناجح بما في ذلك إجراءات التلقيح الاصطناعي. وهذا يطرح صعوبات كثيرة لتطوير طريقة زراعة موثوقة من شأنها أن تدعم نمو ليس فقط من البويضات البشرية ولكن أيضا لأنواع الثدييات الكبيرة الأخرى. الخطوة الأولى في IVM هي ثقافة في المختبر من البويضات. يصف هذا العمل بروتوكولين لثقافة البويضات البورسين 3D. في الأول، يتم تغليف 3D نموذج كومبلوس-بويضة المجمعات (COCs) في شبكة توسط حبة الفيبرين alginate، حيث يتم هلام مزيج من الفيبرين و alginate في وقت واحد. وفي الثانية، يتم تعليق مركبات الكربون في قطرة متوسطة ومغلفة بروبيلين الإيثيلين المفلور (FEP؛ copolymer من سداسي فلوري بروبلين وتترافلور إيثيلين) جزيئات مسحوق لتشكيل ميكروبيورياكات تعرف بأنها كرات من الرخام السائل (LM). كلا النظامين ثلاثي الأبعاد يحافظان على البيئة الغازية في بيئة الاستزراع في المختبر. كما أنها تحافظ على منظمة COCs 3D من خلال منع تسطيحها وما يترتب على ذلك من تعطيل الوصلات الفجوة، وبالتالي الحفاظ على العلاقة الوظيفية بين البويضات، والخلايا الجريب المحيطة بها.
Introduction
تطوير أنظمة الثقافة المختلفة، بما في ذلك ثلاثية الأبعاد (3D) منها، يهدف إلى توفير الظروف المثلى لنمو ونضج البويضات المعزولة من بصيلات حتى في المراحل الأولى من التنمية. وهذا أمر ذو أهمية كبيرة بالنسبة لتقنيات المساعدة على الإنجاب (ART)، خاصة بالنظر إلى العدد المتزايد من النساء اللواتي يكافحن مع العقم بعد علاج السرطان1. نضوج البويضات في ظروف في المختبر (IVM) هو بالفعل تقنية راسخة تستخدم أساسا لتوليد الجنين في المختبر لغرض تكاثر الماشية2. ومع ذلك، في معظم أنواع الثدييات، حتى لو كان يمكن تحقيق معدلات عالية من نضوج مجمعات الزبيب الكمولي (COCs) (تتراوح بين 60 و 90 ٪3، فإن كفاءتها التنموية لا تزال غير كافية لتلبية الاحتياجات. هذا لأنّ التطوير من الزّجوت ينال في هذا طريق حتّى حتّى إلى الوّحدة طور منخفضة وبعد الإنتقال داخل بديلة خفّض قدرتهم أن يكون عمليّة إلى عبارة. وبالتالي، هناك حاجة إلى زيادة الكفاءة التنموية للأجنة التي تم الحصول عليها من البويضات التي خضعت لإجراء IVM4. لذلك، يتم ابتكار وسائل الإعلام نضوج جديدة5 وفترات مختلفة من الثقافة في المختبر6,7 جنبا إلى جنب مع مكملات وسائل الإعلام الثقافة مع عوامل النمو المختلفة والجزيئات8,9.
الخطوة الأولى من أي نظام IVM كاملة هي خلق الظروف المثلى للنمو المستدام للبويضات خلال الثقافة في المختبر. نمو البويضة هو واحد من المؤشرات المحددة لقدرة البويضة على استئناف البويضات10،11. وبالإضافة إلى ذلك، يجب أن يكون البويضة المناسبة في نظام ثقافة في المختبر قادرة على دعم نضوجها النووي والتمايز السيتوبلازمي12. مورفولوجيا مركب الزبيب الكمولي هو مؤشر مهم آخر يستخدم في عيادات العلاج بمضادات الفيروسات القهقرية لاختيار أفضل البويضات للخطوات اللاحقة من الإخصاب في المختبر (IVF) الإجراء في البشر والماشية12،13. ومن بين الخصائص المورفولوجية ل COCs التي تعتبر: قطر البويضة، حبيبات السيتوبلازم وأول نزاهة الجسم القطبي14،15. إلى جانب ذلك، يرتبط إمكانات النمو البويضية إلى مظهر وضغط الخلايا الركامية وعدد طبقاتها المحيطة البويضة. مهم جداً لبويضات مناسبة في نظام ثقافة فيترو هو أيضا الحفاظ على الخلايا البويضية-cumulus التفاعلات السليمة والاستقرار cytoskeleton16,17,18,19. حتى الآن، في في المختبر بويضة النمو داخل COCs الإنسان وقد ثبت20. كما نتج عن استخدام COCs البقر مع الولادات الحية. تم عزل هذه من بصيلات المبيض غير ناضجة ثم مثقف لمدة 14 يوما حتى البويضة كانت كبيرة بما فيه الكفاية للخضوع لعملية التلقيح الاصطناعي21. وبالمثل، COCs معزولة عن بصيلات البابون انترال، التي تعرضت لIVM بعد في ثقافة في المختبر أسفرت عن البويضات قادرة على إعادة الميوسيس إلى المرحلة الثانية metaphase مع هيكل المغزل العادي الظهور22. ومع ذلك ، في هذه الدراسة لم يحاول المؤلفون تخصيبها. ومع ذلك تشير هذه النتائج إلى أن إجراء مماثل يمكن تطبيقه ليس فقط على هذه الأنواع الثديية الخاصة ولكن أيضا على مجمعات الكومبولوس- البويضة البشرية التي يتم الحصول عليها من الجريبات ما ينبغي أن يسمح بالحصول على بويضات ذات نوعية جيدة مناسبة لتقنية التلقيح الصناعي الناجحة.
تم الحصول على النتائج المذكورة أعلاه مع تطبيق بروتوكولات IVM التقليدية التي تم خلالها استزراع البويضات في أنظمة ثنائية الأبعاد. الإجراء الروتيني في أنظمة الثقافة 2D يغطي البويضات، مغمورة في قطرة من وسائل الإعلام الثقافة المناسبة، مع النفط المعدني23،24. ومن المفترض أن تراكب النفط خلال في تربية البويض في المختبر يعمل على منع تبخر السائل، وبالتالي ضمان الحفاظ على درجة الهضاح السليمة والضغط التناضح في الثقافة. على الرغم من أن مثل هذا النظام ثقافة 2D يسمح للحصول على, حتى تصل إلى 87% من البويضات الخنازير ناضجة25, وقد ثبت أن تراكب النفط المعدني يسبب انتشار كبير من المواد القابلة للذوبان في الدهون التي هي ضرورية لتطوير البويضات السليم26. بالإضافة إلى ذلك، بسبب المنشطات (البروجسترون وهرمون الاستروجين) انتشار في الزيوت المعدنية خلال ثقافة البويض، لوحظ تأخير النضج النووي والحد من تحقيق الكفاءة التنموية من البويضات الخنازير. وهذا قد يؤدي إلى الحصول على عدد قليل من zygotes، والتي بالإضافة إلى ذلك تتميز القدرة التنموية المنخفضة لمرحلة الكيسة الأردية وبضعف الجدوى بعد نقلها إلى الحيوانات المتلقية27. لذلك، يتم بذل محاولات لزيادة الكفاءة التنموية للأجنة المشتقة من البويضات التي يتم تلقيها بعد إجراء IVM، من خلال خلق الظروف المثلى لتحقيق كل من النضج السيتوبلازمي والنووي للبويضات المستزرعة مع CCs كمجمعات، خاصة باستخدام أنظمة ثلاثية الأبعاد (3D). وقد تم تطوير مختلف النظم المبتكرة 3D في الثقافة في المختبر في العقدين الماضيين28,29. وقد صممت هذه للحفاظ على التنظيم المكاني الطبيعي للخلايا وتجنب تسطيحها في أطباق الثقافة ما لا يمكن تحقيقه في الثقافات التقليدية 2D. يمكن ضمان النشاط الهيكلي والوظيفي للCOCS مثقف من خلال الحفاظ على الهندسة المعمارية السليمة والاتصال دون عائق من خلال الفجوة – الوصلات بين مختلف المقصورات30. وقد تم تقييم ملاءمة سقالات حيوية لثقافة 3D في المختبر من مجمعات التراكمات البويضية باستخدام المواد الحيوية الطبيعية مثل مكونات مختلفة من المصفوفة خارج الخلوية (ECM؛ الكولاجين وحمض الهيالورونيكس)31 أو البوليمرات الخاملة (alginate)32. هذه المحاولات التي تم اختبارها في عدة أنواع جلبت نتائج واعدة من حيث استئناف البويضات meiosis وتحقيق كفاءتها الكاملة33,34,35. ولكن حتى الآن، لم يتم تطوير أي نظام ثلاثي الأبعاد مناسب لنضوج COCs المعزول عن الحيوانات الأليفة الكبيرة، بما في ذلك الخنازير.
يصف هذا العمل بروتوكولين يمكن استخدامهما لثقافة الـ 3D لـ PORcine COCs. يصف البروتوكول الأول التغليف في الخرز الفيبرين-ألجينات (FAB). يمكن تشكيل FAB عن طريق خلط محلول ألجينات والفيبرين في وقت واحد ، والتي تخضع لعملية هلام متزامن. يوفر هذا المزيج بيئة ميكانيكية ديناميكية لأن كلا المكونين يساهمان في صلابة المصفوفة. وقد استخدم حل مماثل سابقا لثقافة بصيلات المبيض الماوس ونضج36. في حالة البروتوكول المقدم، لتجنب التحلل المبكر لشبكة الفليبين، يتم استخدام تركيزات أعلى بشكل مناسب من محلول كلوريد الكالسيوم، مما يضمن عملية هلام سريعة ومستقرة. البيئة الميكانيكية الديناميكية تخلق ظروف مماثلة لهذه الظروف في البيئة الطبيعية داخل الجريب الذي تتواجد فيه COCs وتزيد في الحجم. بالإضافة إلى ذلك، يعرض العمل نتائج تمثيلية لنظم الثقافة ثلاثية الأبعاد COCs، حيث يتم تعليق هذه في قطرة متوسطة ومغلفة بروبلين الإيثيلين المفلور (FEP؛ copolymer من سداسي فلوريورو بروبلين وجسيمات رباعية الفلور إيثيلين) المسحوق، لتشكيل ميكروبيورياكتوريس (الرخام السائل، LM). LM هي شكل من أشكال 3D مفاعل حيوي التي ثبت سابقا لدعم, من بين أمور أخرى, نمو الكائنات الحية الدقيقة الحية37, الورم spheroids38 والخلايا الجذعية الجنينية39. وقد تم أيضا استخدام LMs بنجاح لتربية البويضات الأغنام40. في معظم التجارب باستخدام LMs، تم إعداد المفاعلات الحيوية باستخدام سرير مسحوق اثيلين متعددtetrafluoro (PTFE) بحجم جسيم 1 ميكرومتر41. البروتوكول المقدم يستخدم FEP، وهو مشابه جداً في التركيب وخصائص لـ PTFE الفلوروبوليمرات. ولكن FEP هو أكثر سهولة شكل ونعومة من PTFE وما هو مهم بشكل خاص، فمن شفافة للغاية.
كلا النظامين ثلاثي الأبعاد يحافظان على البيئة الغازية في بيئة الاستزراع في المختبر. كما أنها تحافظ على COCs 3D المنظمة من خلال منع تسطيح وما يترتب على ذلك من تعطيل الوصلات الفجوة، والحفاظ على علاقتهم الوظيفية بين البويضات والخلايا الجريب المحيطة بها.
Protocol
Representative Results
Discussion
إن القدرة على الحفاظ على نمو في المختبر ليس فقط من البويضة ولكن أيضاً خلايا الكمولو المحيطة به وفي نفس الوقت دعم نضوجه ضرورية للغاية لتكنولوجيات الإنجاب المساعدة الناجحة وتعزيز فهم تفاعلات الخلايا الجسدية/البويض خاصة في الأنواع التي تمر بنمو جراسي طويل مثل البشر أو الخنازير. تقنيات IVM ال?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الكتاب ممتنون جدا ل: الدكتور Waclaw Tworzydlo (قسم علم الأحياء التنموية والرففات مورفولوجيا، معهد علم الحيوان والبحوث الطبية الحيوية، جامعة Jagiellonian) للمرافق التقنية في TEM; السيدة بياتا ساكوسكا (قسم الغدد الصماء، معهد علم الحيوان والبحوث الطبية الحيوية، جامعة جاجيلونيان) للحصول على المساعدة التقنية؛ إلى قسم بيولوجيا الخلية والتصوير، معهد علم الحيوان والبحوث الطبية الحيوية، جامعة جاجيلونيان، JEOL JEM 2100HT (JEOL، طوكيو، اليابان). وقد تم دعم هذا العمل بمنحة 2018/29/N/NZ9/00983 من المركز الوطني للعلوم في بولندا.
Materials
| General | |||
| Antibiotic Antimycotic (100x) 100ml | Thermo Fisher | 15240062 | 2.5% final concentration for Handling Medium. 1% in PBS (step 1.2) |
| DMEM/F12 (500ml) | Sigma-Aldrich | D8062 | Handling and Maturation Medium |
| DPBS (w/o Ca, Mg), 1x, 500ml | Thermo Fisher | 14190144 | |
| FCS (100 ml) | Thermo Fisher | 16140063 | 10% final concentration for both Handling Medium and Maturation Medium. (steps: 1.5. 2.6.) |
| PBS (1x, pH 7.4) 500ml | Thermo Fisher | 10010023 | |
| TBS Stock Solution (10x, pH 7.4) 500 ml | Cayman Chemicals | 600232 | 1x final concentration. Other brand can be use |
| Maturation Medium | |||
| hCG (1 VIAL of 10 000 U) | Sigma-Aldrich | CG10 | |
| PMSG | BioVendor | RP1782721000 | |
| Fibrin-alginate beads | |||
| Alginate Lyase | Sigma-Aldrich | A1603 | (Step 2.11.1) |
| Thrombin | Sigma-Aldrich | T9326-150UN | (Step 2.1) |
| Calcium Chloride | Sigma-Aldrich | C5670 | (Step 2.1) |
| Fibrinogen (250mg) | Sigma-Aldrich | F3879 | (Step 2.2) |
| Sodium Alginate | Sigma-Aldrich | W201502 | (Step 2.3) use for alginate solution |
| Liquid Marble | |||
| FEP | Dyneon GmbH 3M AdMD | A-66670 | |
| Morphological examination | |||
| LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit, for mammalian cells | Thermo Fisher | L3224 | (Step 4.1.) Emitted fluorescence: 494 nm for calcein, 528 nm for EthD-1; measure: 517 nm for calcein, 617 nm – EthD-1 |
| VECTASHIELD Antifade Mounting Medium | Vector Laboratories | H-1000 | mounting medium |
| Ultrastructure examination | |||
| Glutaraldehyde solution | Sigma-Aldrich | G5882 | 2.5% final concentraion (Step 4.2.1.) |
| LR White resin | Sigma-Aldrich | L9774 | (Step 4.2.4.) |
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | (Step 4.2.5.) |
| Osmium Tetroxide | Sigma-Aldrich | O5500 | (Step 4.2.3.) |
| Sodium cacodylate trihydrate | Sigma-Aldrich | C0250 | Use for preparing 0.1M sodium cacodylate buffer (pH 7.2) |
| Uranyl Acetate | POCH | 868540111 | (Step 4.2.4.) |
| Specific instruments, tools | |||
| 30 mm Pteri dish | TPP | 93040 | |
| 60 mm IVF Petri dish | Falcon | 353653 | |
| Ez-Grid Premium Cell Handling Pipettor | RI Life Sciences | 8-72-288 | |
| Ez-Tip | RI Life Sciences | 8-72-4155/20 | |
| Heating Table | SEMIC | Other brands can be used | |
| Incubator | Panasonic | MCO-170AIC-PE | Other brands can be used |
| Sterile petri dish (10 cm) | NEST Biotechnology | 704002 | |
| Sterile syringe filters with 0.2 µm | GOOGLAB SCIENTIFIC | GB-30-022PES | |
| Thermos | Quechua | 5602589 | Other brands can be used |
Referenzen
- Jeruss, J. S., Woodruff, T. K. Preservation of fertility in patients with cancer. The New England Journal of Medicine. 360 (9), 902-911 (2009).
- Paramio, M. T., Izquierdo, D. Current status of in vitro embryo production in sheep and goats. Reproduction in Domestic Animals. 49 (4), 37-48 (2014).
- Gilchrist, R. B., Thompson, J. G. Oocyte maturation: emerging concepts and technologies to improve developmental potential in vitro. Theriogenology. 67 (1), 6-15 (2007).
- Nogueira, D., Sadeu, J. C., Montagut, J. In vitro oocyte maturation: current status. Seminars in Reproductive Medicine. 30 (3), 199-213 (2012).
- Farsi, M. M., Kamali, N., Pourghasem, M. Embryological aspects of oocyte in vitro maturation. International Journal of Molecular and Cellular Medicine. 2 (3), 99-109 (2013).
- You, J., et al. Treatment with the proteasome inhibitor MG132 during the end of oocyte maturation improves oocyte competence for development after fertilization in cattle. PLOS One. 7 (11), 48613 (2012).
- Donnay, I., et al. Effect of prematuration, meiosis activating sterol and enriched maturation medium on the nuclear maturation and competence to development of calf oocytes. Theriogenology. 62 (6), 1093-1107 (2004).
- Ledda, S., Bogliolo, L., Leoni, G., Calvia, P., Naitana, S. Influence of vasoactive intestinal peptide (VIP), atrial natriuretic peptide (ANP) and insulin-like growth factor-I (IGF-I) on in vitro maturation of prepubertal and adult sheep oocytes. Zygote. 4 (4), 343-348 (1996).
- Uhm, S. J., et al. Epidermal growth factor can be used in lieu of follicle-stimulating hormone for nuclear maturation of porcine oocytes in vitro. Theriogenology. 73 (8), 1024-1036 (2010).
- Fair, T., Hyttel, P., Greve, T. Bovine oocyte diameter in relation to maturational competence and transcriptional activity. Molecular Reproduction and Development. 42 (4), 437-442 (1995).
- Sirard, M. A. Follicle environment and quality of in vitro matured oocytes. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 28 (6), 483-488 (2011).
- Banwell, K. M., Thompson, J. G. In vitro maturation of Mammalian oocytes: outcomes and consequences. Seminars in Reproductive Medicine. 26 (2), 162-174 (2008).
- de Smedt, V., Crozet, N., Gall, L. Morphological and functional changes accompanying the acquisition of the meiotic competence in ovarian goat oocyte. Journal of Experimental Zoology. 269 (2), 128-139 (1994).
- Luca, X., et al. Relationship between antral follicular size, oocyte diameters and nuclear maturation of immature oocyte in pigs. Theriogenology. 58 (5), 870-885 (2002).
- Abeydeera, L. R. In vitro production of embryo in swine. Theriogenology. 57 (1), 256-273 (2002).
- Carabatsos, M. J., Sellitto, C., Goodenough, D. A., Albertini, D. F. Oocyte-granulosa cell heterologous gap junctions are required for the coordination of nuclear and cytoplasmic meiotic competence. Entwicklungsbiologie. 226 (2), 167-179 (2000).
- Hashimoto, S., et al. Effects of cumulus cell density during in vitro maturation of the developmental competence of bovine oocytes. Theriogenology. 49 (8), 1451-1463 (1998).
- Zuccotti, M., Merico, V., Cecconi, S., Redi, C. A., Garagna, S. What does it take to make a developmentally competent mammalian egg. Human Reproduction Update. 17 (4), 525-540 (2011).
- Albertini, D. F., Barrett, S. L. Oocyte-somatic cell communication. Reproduction. Supplement. 61, 49-54 (2003).
- Cavilla, J. L., Kennedy, C. R., Byskov, A. G., Hartshorne, G. M. Human immature oocytes grow during culture for IVM. Human Reproduction. 23 (1), 37-45 (2008).
- Hirao, Y., et al. In vitro growth and development of bovine oocyte-granulosa cell complexes on the flat substratum: effects of high polyvinylpyrrolidone concentration in culture medium. Biology of Reproduction. 70 (1), 83-91 (2004).
- Xu, M., et al. In vitro oocyte maturation and preantral follicle culture from the luteal-phase baboon ovary produce mature oocytes. Biology of Reproduction. 84 (4), 680-697 (2011).
- Ka, H., Sawai, K., Wang, W. H., Im, K. S., Niwa, K. Amino acids in maturation medium and presence of cumulus cells at fertilization promote male pronuclear formation in porcine oocytes matured and penetrated in vitro. Biology of Reproduction. 57, 478-483 (1997).
- Shimada, M., Zeng, W. X., Terada, T. Inhibition of PI 3-kinase or MEK leads to suppression of p34cdc2 kinase activity and meiotic progression beyond the MI stage in porcine oocytes surrounded with cumulus cells. Biology of Reproduction. 65, 442-448 (2001).
- Coy, P., Romar, R. In vitro production of pig embryos: a point of view. Reproduction Fertility and Development. 14, 275-286 (2002).
- Reinsberg, J., Ackermann, D., Vander Ven, H. Pitfalls in assessment of progesterone production by granulosa cells cultured in contact with silicone rubber or paraffin oil. Archives Gynecology Obstetrics. 270, 174-178 (2004).
- Shimada, M., Kawano, N., Terada, T. Delay of nuclear maturation and reduction in developmental competence of pig oocytes after mineral oil overlay of in vitro maturation media. Reproduction. 124, 557-564 (2002).
- Cekleniak, N. A., et al. Novel system for in vitro maturation of human oocytes. Fertility and Sterility. 75, 1185-1193 (2001).
- Cukierman, E., Pankov, R., Yamada, K. M. Cell interactions with three-dimensional matrices. Current Opinion in Cell Biology. 14, 633-639 (2002).
- Desai, N., et al. Three-dimensional in vitro follicle growth: Overview of culture models, biomaterials, design parameters and future directions. Reproductive Biology and Endocrinology. 8 (119), (2010).
- Combelles, C. M., Fissore, R. A., Albertini, D. F., Racowsky, C. In vitro maturation of human oocytes and cumulus cells using a co-culture three-dimensional collagen gel system. Human Reproduction. 20, 1349-1358 (2005).
- Dorati, R., et al. Formulation and stability evaluation of 3D alginate beads potentially useful for cumulus-oocyte complexes culture. Journal of Microencapsulation. 33, 137-145 (2016).
- Morselli, M. G., Canziani, S., Vigo, D., Luvoni, G. C. A three-dimensional alginate system for in vitro culture of cumulus-denuded feline oocytes. Reproduction in Domestic Animals. 52 (1), 83-88 (2017).
- Pangas, S. A., Saudye, H., Shea, L. D., Woodruff, T. K. Novel approach for the three-dimensional culture of granulosa cell-oocyte complexes. Tissue Engineering. 9 (5), 1013-1021 (2003).
- Shen, P., et al. A new three-dimensional glass scaffold increases the in vitro maturation efficiency of buffalo (Bubalus bubalis) oocyte via remodeling the extracellular matrix and cell connection of cumulus cells. Reproduction in Domestic Animals. 55 (2), 170-180 (2020).
- Kniazeva, E., et al. Primordial follicle transplantation within designer biomaterial grafts produce live births in a mouse infertility model. Scientific Reports. 5, 17709 (2015).
- Tian, J., Fu, N., Chen, X. D., Shen, W. Respirable liquid marble for the cultivation of microorganisms. Colloids and Surfaces B Biointerfaces. 106, 187-190 (2013).
- Arbatan, T., Al-Abboodi, A., Sarvi, F., Chan, P. P., Shen, W. Tumor inside a pearl drop. Advanced Healthcare Materials. 1 (4), 467-469 (2012).
- Sarvi, F., et al. Cardiogenesis of embryonic stem cells with liquid marble micro-bioreactor. Advanced Healthcare Materials. 4 (1), 77-86 (2015).
- Ledda, S., et al. A novel technique for in vitro maturation of sheep oocytes in a liquid marble microbioreactor. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 33 (4), 513-518 (2016).
- Ooi, C. H., Nguyen, N. T. Manipulation of liquid marbles. Microfluid Nanofluid. 19, 483-495 (2015).
- Lin, P., Rui, R. Effects of follicular size and FSH on granulosa cell apoptosis and atresia in porcine antral follicles. Molecular Reproduction Development. 77 (8), 670-678 (2010).
- Eppig, J. J., O’Brien, M. J. Development in vitro of mouse oocytes from primordial follicles. Biology of Reproduction. 54 (1), 197-207 (1996).
- Dolmans, M. M., et al. Evaluation of Liberase, a purified enzyme blend, for the isolation of human primordial and primary ovarian follicles. Human Reproduction. 21 (2), 413-420 (2006).
- Reader, K. L., Stanton, J. A., Juenge, J. L. The role of oocyte organelles in determining developmental competence. Biologie. 6, 35-57 (2017).
- Shikanov, A., Xu, M., Woodruff, T. K., Shea, L. D. A method for ovarian follicle encapsulation and culture in a proteolytically degradable 3-dimensional system. Journal of Visualized Experiments. (49), e2695 (2011).
- Aussillous, P., Quere, D. Liquid Marbles. Nature. 411, 924-927 (2001).
- Serrano, M. C., Nardecchia, S., Gutiérrez, M. C., Ferrer, M. L., del Monte, F. Mammalian cell cryopreservation by using liquid marbles. ACS Applied Materials & Interfaces. 7, 3854-3860 (2015).
- Arbatan, T., Li, L., Tian, J., Shen, W. Liquid marbles as micro-bioreactors for rapid blood typing. Advance Healthcare Materials. 1 (1), 80-83 (2012).
- Brevini, T. A. L., Manzoni, E. F. M., Ledda, S., Gandolfi, F., Turksen, K. Use of a Super-hydrophobic Microbioreactor to Generate and Boost Pancreatic Mini Organoids. Organoids. Methods in Molecular Biology. , 291-299 (2017).
